[发明专利]一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法及应用

摘要

本发明涉及一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法及应用。所述一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法通过优化直接ELISA检测法的参数，包括包被抗原为1μg/mL，抗体最适稀释度1：800；最佳封闭时间为60.42min，酶标抗体最佳反应时间为149.63min，底物液作用最佳反应时间为15.03min，最终绘制直接ELISA检测法的标准曲线。在应用直接ELISA检测法测量时，将待测大豆球蛋白溶液先后与大豆球蛋白特异多克隆一抗、将酶标记抗兔IgG作为酶标二抗进行反应，再加入底物液显色，用标准曲线进行判断，直接得到待测大豆球蛋白溶液的大豆球蛋白含量。该检测方法具有简单，快速、成本低，耗时短等特点，可应用于大豆及其深加工产品中大豆球蛋白含量的检测。

主权项

一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法，包括以下步骤：⑴包被抗原的获取：用包被缓冲液稀释不同浓度的大豆球蛋白,在聚苯乙烯板的反应孔中加100μl，4℃过夜，洗涤，获得包被抗原；⑵封闭：每孔加入封闭液于37℃进行封闭，封闭时间为1～2h，洗涤；⑶加样：加入不同浓度的大豆球蛋白特异多隆抗体与相应的抗原结合，每孔100μl，置37℃孵育1h，洗涤；⑷加酶标二抗：将辣根过氧化酶标记抗兔IgG用抗体稀释液稀释5000倍，取100μl加入不同反应孔中，37℃，酶标二抗作用时间为2h，洗涤；⑸加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液100μl，37℃，底物液作用时间为15min～25min；⑹终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸50μl；(7)绘制标准曲线。