[发明专利]一种巨芒化学消毒组培方法

摘要

本发明涉及一种巨芒化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的巨芒化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了巨芒组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低巨芒的组培成本，一般可降低成本10％以上。

主权项

一种巨芒化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、愈伤组织诱导培养、分化培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：愈伤组织诱导培养基为MS+2～5mg/L 2，4‑D+0.5～2g/L AC+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；分化培养基为：MS+3～8mg/L 6‑BA+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+50～100mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌呤；所述NAA，指〆‑萘乙酸；所述AC，指活性炭；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)愈伤组织诱导培养：于巨芒的旗叶期，截取幼穗的长度为10‑20cm，去除外层苞叶，仅留一片内叶；先用体积比为70％的酒精表面消毒1min，蒸馏水清洗3次，再用镊子剥去内叶，体积比为2％的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗3‑4次，在超净工作台上将幼穗切成2mm的小段，放在愈伤组织诱导培养基上培养，每周转接一次；培养室温度为25～28℃，暗培养；4周后转到光照培养，光照强度为1500～2000lx；(4)分化培养：挑取诱导培养获得的部分黄绿色愈伤组织，接种到分化培养基中，培养4周成为不具根的小苗，每30d转接一次；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为2000～3000lx；(5)生根培养：将分化培养的不具根小苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为25℃，光照16h，光照强度为2000～3000lx；(6)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至大棚的耕作土中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。