[发明专利]一种铁皮石斛组培繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛组培繁殖的方法，包括如下步骤(1)外植体的选取和处理；(2)诱导愈伤组织培养；(3)分化培养；(4)壮苗培养；(5)生根培养；(6)炼苗与移栽。本发明提供了一种铁皮石斛组培繁殖的方法具有能缩短生产培养单周期和生长周期，而且能提高育苗成活率，从而减少投资资金，降低生产成本，提高工业化生产的利润的优点。

主权项

一种铁皮石斛组培繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选取和处理：选取直径为0.2‑0.5cm的铁皮石斛茎，使用酒精消毒后在无菌超净台下对铁皮石斛茎进行横切，然后纵切得到长0.5‑2cm，宽0.1‑0.3cm的茎片条待用；(2)诱导愈伤组织培养使用镊子将茎片条放入愈伤组织培养基上，轻压茎片条，使茎片条与愈伤组织培养基紧贴，所述愈伤组织培养的培养基配方为：1/2MS+NAA 0.1～0.2mg/L+KT 0.3～0.5mg/L+BA 0.1～0.3mg/L+5～8g/L琼脂+20～30g/L蔗糖+5～8g/L花生汁，pH为5.0‑5.5，在25～30℃下，光暗交替培养20天，得到愈伤组织；(3)分化培养将愈伤组织转接到MS+6‑BA 0.3～0.6mg/L+NAA 0.3～0.6mg/L+2,4‑D 0.3～0.5mg/L+10～15g/L琼脂+30～50g/L蔗糖的分化培养基上培养，pH为5.0‑5.5，光照强度为1000‑1500lx，光培养8‑15d，愈伤组织分化得到铁皮石斛苗；(4)壮苗培养将铁皮石斛苗转接至壮苗培养基上继续培养，所述壮苗培养基成分为IBA 0.3～0.7mg/L+NAA 0.3～0.5mg/L+2,4‑D 0.5～0.8mg/L+10～15g/L琼脂+30～50g/L蔗糖+10～15g/L香蕉泥，pH为5.0‑5.5，光照强度为1500‑1800lx，培养8‑15d；(5)生根培养将壮苗培育后的铁皮石斛苗转接至生根培养基上培养，所述生根培养基配方为IBA 2～5mg/L+NAA 2～5mg/L+0.1～0.2g/L活性炭+5～10g/L琼脂+20～30g/L蔗糖+10～15g/L马铃薯泥，光照强度为2500‑4500lx，培养3‑8d；(6)炼苗与移栽选取根系发达及健壮的铁皮石斛幼苗进行闭瓶培养3‑5天后，再取出铁皮石斛幼苗洗净根部培养基，在用0.1～0.2％高锰酸钾进行消毒的砂床上驯化10‑20天后，沙床湿度为50～80％；沙床的温度控制在20℃～35℃，移栽至种植基质中，所述种植基质是将按树皮、松树皮和泥炭按照重量份数比为1:1:2进行混合，堆沤10‑15天即可得到种植基质。