[发明专利]微生物酶转化人参茎叶皂苷制备人参稀有皂苷的方法

摘要

本发明公开一种微生物酶转化人参茎叶皂苷制备人参稀有皂苷的方法，其是以曲霉菌微生物发酵得到的酶液与廉价的人参皂苷Rb3、Rc、Rb2、Rd等含量高的人参或者西洋茎叶原二醇类皂苷/或者三七参茎叶皂苷反应，制备高活性的人参稀有皂苷C‑Mx、C‑Mc、C‑Y、C‑K混合物和其单体的方法，成本低、工艺简单、无污染；产品可用于人参制品、功能食品、化妆品。

主权项

一种微生物酶转化人参茎叶皂苷制备人参稀有皂苷的方法，其特征在于是以曲霉菌微生物发酵得到的酶液与人参茎叶原二醇类皂苷或西洋参茎叶原二醇类皂苷或三七参茎叶皂苷反应，制备人参稀有皂苷C‑Mx、C‑Mc、C‑Y、C‑K；所述曲霉菌是黑曲霉（Aspergillus niger）或米曲霉（Aspergillus oryzae）菌；所述曲霉菌微生物发酵得到的酶是以曲霉菌微生物液态发酵制备，液态发酵培养基中酶的诱导物是人参茎叶皂苷、西洋参茎叶皂苷、三七参茎叶皂苷、人参茎叶粉、西洋参茎叶粉、三七参茎叶粉或槐花粉，加量为液态培养基质量0.01～0.1%；发酵温度27～35℃，培养发酵时间3～9天；收集发酵液，离心除渣，取上清液用硫酸铵、甲醇或乙醇沉淀酶蛋白，收集沉淀；将所收集蛋白沉淀溶解于1/5～1/20发酵液体积的0.005～0.1摩尔、pH为4.5～6.5的醋酸、柠檬酸或磷酸缓冲液，即为酶液；或者所述曲霉菌微生物发酵得到的酶是以曲霉菌微生物固态发酵制备，固态发酵培养基中酶的诱导物是人参茎叶粉、西洋参茎叶粉、三七参茎叶粉或槐花粉，加量为固态培养基质量1～25%；发酵温度27～35℃，培养发酵时间3～9天；以0.5~2倍固体原料体积的0.02摩尔、pH5.0的醋酸缓冲液浸出发酵液并收集发酵液，离心除渣，取上清液用硫酸铵、甲醇或乙醇沉淀酶蛋白，收集沉淀；将所收集蛋白沉淀溶解于1/5～1/20发酵液体积的0.005～0.1摩尔、pH为4.5～6.5的醋酸、柠檬酸或磷酸缓冲液，即为酶液；所述酶液与人参茎叶原二醇类皂苷或西洋参茎叶原二醇类皂苷或三七参茎叶皂苷反应是先用0.005～0.1摩尔、pH为4.5～6.5醋酸缓冲液或0.005～0.1摩尔、pH为4.5～6.5柠檬酸或者磷酸缓冲液溶解人参茎叶原二醇类皂苷或西洋参茎叶原二醇类皂苷或三七参茎叶皂苷，然后再与酶液进行反应，反应的底物浓度为0.5～7%，反应温度为35～60℃，反应时间为14～68小时；用大孔树脂吸附皂苷法分离酶和反应产物皂苷，再用水、乙醇分别洗脱吸附皂苷的大孔树脂，收集乙醇洗脱液、脱色、减压浓缩、干燥得到反应产物，即混合皂苷。