[发明专利]脐带血造血干细胞的体外扩增方法

摘要

本发明提供了一种率脐带血造血干细胞的体外扩增方法。本发明对培养过程进行了优化筛选，使其培养获得的HSCA不仅能够满足大量级的人群需要，同时还具有比骨髓移植后拥有更长的寿命且移植物抗宿主病的发生率低。本发明简单易行，成本低廉，使用效果好。

主权项

一种脐带血造血干细胞的体外扩增方法，其特征在于：包括如下步骤：1) 将脐带血和无血清培养基按1:1的体积比进行混合；缓慢加入淋巴细胞分离液上层；用比重为1.077的淋巴细胞分离液分离脐带血中的单个核细胞，50ml离心管中其体积比为10：35，室温下2000rpm 离心20分钟；2）吸取单个核细胞悬液，将所取单个核细胞悬液用30ml生理盐水洗两次，每次1000rpm离心10分钟，弃上清；3）将所得单个核细胞的1/3量进行体外细胞培养， 另2/3细胞量进行液氮保存；4）体外细胞培养用无血清培养基，并加入干细胞生长因子100ng/ml 、促血小板生成素100ng/ml以及粒细胞刺激因子100ng/ml, 细胞浓度调整为5x10⁵/ml；在37^oC，质量百分比浓度为5% CO₂孵育箱中培养5天；5）将冻存的另外2/3量的单个核细胞复苏，加入到已经体外培养的单个核细胞中继续共同培养；同时补足干细胞生长因子的浓度，培养时间为10天；在这10天细胞培养过程当中，每3‑4天换液一次，补足干细胞生长因子；6）培养结束后， 将细胞用生理盐水洗2次，检测CD34+细胞数，并进行生物安全监测。