[发明专利]近红外荧光探针铜纳米簇的合成方法及其应用

摘要

本发明公开了近红外荧光探针铜纳米簇的合成方法及对糖蛋白的检测方法。它通过“一锅法”合成近红外荧光铜纳米簇，进而用间氨基苯硼酸对已合成的铜纳米簇进行功能化改造，得到能化的铜纳米簇。由于间氨基苯硼酸上的硼酸基团与糖蛋白中顺式二醇的特异性作用，猝灭铜纳米簇荧光强度，该荧光探针能够实现高特异性、高灵敏检测糖蛋白。糖蛋白广泛存在于粘液、血浆、细胞质及细胞膜中，与生物机体有着密切的联系，是一类重要生理活性物质,而且糖蛋白与某些遗传疾病密切相关，所以检测糖蛋白是具有很重要的实际意义的。

主权项

近红外荧光探针铜纳米簇的合成方法，其特征在于按如下步骤进行：（1）铜纳米簇的制备：称取60‑160 mg牛血清蛋白溶解于装有10 mL高纯水的烧杯中，用移液枪取250 μL氯化铜溶液（0.1 M）注入溶液中，室温搅拌；待体系反应30 min，用移液枪移取0.2‑1.5 mL 80 %水合肼（w/w）慢慢注射到反应体系中，快速补水至40mL,再在室温搅拌5 h，待溶液呈现淡黄色，说明铜纳米簇的生成；（2）纯化：用截留分子量6000‑8000，直径25 mm透析袋对制得铜纳米簇进行纯化，每4 h换一次高纯水，透析24 h，待透析完成后将纯化的铜纳米簇真空35℃干燥，得到在330 nm光的激发下，发射在620 nm近红外区域的荧光铜纳米簇；（3）功能化：①将真空干燥得到的铜纳米簇溶于40 mL高纯水中（浓度为1 mg/mL）；②称取10‑30 mg 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和5‑15 mg N‑羟基琥珀酰亚胺溶于5 mL高纯水中，待溶解后，向溶液中加入10‑30 mg 间氨基苯硼酸，室温搅拌1 h，活化间氨基苯硼酸上的氨基；③向活化体系加入3‑8 mL铜纳米簇（1 mg/mL），室温下搅拌4 h；④待体系反应结束，将溶液在室温下5000 rpm离心，除去未反应的间氨基苯硼酸；⑤上清液放入透析袋中透析,每4 h换一次高纯水，透析24 h，得到间氨基苯硼酸功能化的铜纳米簇。