[发明专利]基于DNA纳米结构的17β‑雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于DNA纳米结构的17β‑雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒。其工作原理为17b‑雌二醇与核酸适体相互作用，启动链置换反应，不断打开三组茎环DNA探针，形成DNA纳米结构，在该DNA纳米结构中的三条DNA臂末端形成具有催化活性的G四聚体。G四聚体与氯高铁血红素结合，从而形成具有类似HRP的催化活性，催化氧化TMB，产生蓝色底物，结果肉眼可见，17b‑雌二醇的浓度与蓝色深浅直接相关。本发明操作简单，可在室温下完成整个反应，具有较高的灵敏度，对17b‑雌二醇的检测限为100 fM，具有很好的特异性，检测结果直接肉眼可见，无需任何检测仪器，可用于17b‑雌二醇的实地现场快速检测。

主权项

一种基于DNA纳米结构的17β‑雌二醇可视化检测试剂盒，其包括如下组分：(1)DNA1：17β‑雌二醇的核酸适体的5’ 或3’端延伸至少24碱基，形成DNA1，其从5’至3’依次包括5单元、2*单元、5单元、1*单元和17β‑雌二醇核酸适体单元；(2)DNA2：DNA2与DNA1的1*单元和部分17β‑雌二醇核酸适体单元互补，DNA2与DNA117β‑雌二醇核酸适体单元的互补碱基数为9‑24个；(3)茎环DNA探针A：从5’到3’依次包括4单元、1单元、5*单元、2单元、5*单元、5单元、3*单元、5单元、2*单元、5单元；(4)茎环DNA探针B：茎环DNA探针B 从5’到3’依次包括4单元、2单元、5*单元、3单元、5*单元、5单元、1*单元、5单元、3*单元、5单元；(5)茎环DNA探针C：茎环DNA探针C从5’到3’依次包括4单元、3单元、5*单元、1单元、5*单元、5单元、2*单元、5单元、1*单元、5单元；茎环DNA探针A‑C中，首尾的4单元和5单元是切割成两部分的G四聚体核酸序列，二者处于分开状态，无法形成完整的G四聚体结构，无催化活性；以上DNA分子中，1、2、3、5单元分别与1*、2*、3*、5*单元互补；(6)氯高铁血红素；(7)H2O2；(8)TMB或ABTS或邻苯二胺；其特征在于，各DNA分子的序列如下所示：DNA1：5'‑ATGGGTCTCACTATGGGTTCAACGGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTAGCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGGAAGC‑3'；DNA2：5'‑ATTCAATAAGCTGGAAGCCGTTGA‑3'；茎环DNA探针A：5'‑TGGGTAGGGCGGGTCGTTGAACCCATAGTGAGACCCATATGGGTCAAGACATGGGTCTCACTATGGGT‑3'；茎环DNA探针B：5'‑TGGGTAGGGCGGGTAGTGAGACCCATGTCTTGACCCATATGGGTTCAACGATGGGTCAAGACATGGGT‑3'；茎环DNA探针C：5'‑TGGGTAGGGCGGGTGTCTTGACCCATCGTTGAACCCATATGGGTCTCACTATGGGT TCAACGATGGGT‑3'。