[发明专利]一种从外周血中体外大量扩增干细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201510283884.0 | 申请日： | 2015-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN104830773B | 公开（公告）日： | 2018-07-17 |
| 发明（设计）人： | 吴立华 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 天津才智专利商标代理有限公司 12108 | 代理人： | 王晓红 |
| 地址： | 300020 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从外周血中体外大量扩增干细胞的培养方法，利用存在于人骨髓外的两种内皮祖细胞做为体外扩增干细胞的微环境细胞，从外周血中大量扩增干细胞。本发明利用存在于骨髓外的两种内皮祖细胞做为微环境在体外完成了大量扩增外周血干细胞的目标，并且直接应用实时监控录像形象的展示了在以这两种内皮祖细胞做为微环境时，干细胞可以得到自我复制的扩增，扩增数量达到100倍，扩增后的干细胞具有干细胞的不对称分裂能力，和向下一级祖细胞分化能力，即应用这两种内皮祖细胞做微环境后，干细胞从数量上较没有微环境细胞时得到了100倍的扩增，扩增后的细胞具有自我复制和向下一级祖细胞分化能力，证实扩增的干细胞具备干细胞的关键两个特性。 | ||
| 搜索关键词： | 干细胞 扩增 微环境 内皮祖细胞 外周血 分化能力 自我复制 祖细胞 细胞 外周血干细胞 分裂能力 实时监控 体外扩增 不对称 人骨髓 体外 骨髓 应用 录像 展示 | ||
【主权项】：
1.一种从外周血中体外大量扩增干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备微环境细胞：来自同一人外周血单个核细胞的晚期内皮祖细胞；2)干细胞扩增：①先从同一人外周血单个核细胞MNC中纯化被扩增的干细胞种子细胞：将步骤1)中的微环境细胞分别预铺到培养皿中，经一定剂量放射处理，将分离好人外周血MNC分别种植到培养皿中，分别收集扩增的呈悬浮状生长的第一代干细胞；②实施外周血干细胞扩增：将收集的第一代扩增纯化的种子干细胞分别种植到经预处理的预铺有微环境细胞的的培养皿中培养，培养液为EGM2；3)扩增的干细胞的鉴定：从细胞形态，自我复制功能，向下一级祖细胞分化能力进行干细胞鉴定。
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