[发明专利]基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏度DNA荧光分析方法

摘要

本发明公开了基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏DNA荧光分析方法。将捕获DNA的3’端固定到磁珠表面，与目标DNA片段杂交后，在末端脱氧核苷酸转移酶的催化作用下，对目标DNA的3’端进行加尾，生成聚胸腺嘧啶，铜离子可以与聚胸腺嘧啶相互作用，抗化学酸钠将二价铜还原成一价铜，一价铜再歧化形成铜纳米粒子附着在目标DNA的聚胸腺嘧啶模板上，铜纳米粒子具有良好的荧光特性，荧光强度与目标DNA的杂交情况相关，通过荧光分析的方法可以实现对DNA片段的高灵敏度、高选择性检测，可应用于分子识别、临床诊断、环境监测及食品安全等领域中DNA样品的检测。

主权项

1.一种基于聚胸腺嘧啶为模板生成铜纳米粒子的高灵敏DNA荧光分析方法，其特征在于，该方法为非诊断用的分析方法，包括如下步骤：步骤一、将链霉亲和素磁珠悬浮在PBS缓冲液中，加入3’端修饰生物素的捕获DNA，反应结束后进行磁分离并用PBS缓冲液反复清洗，其中，所述的链霉亲和素磁珠的浓度为0.5~1.5mg/mL，3’端修饰生物素的捕获DNA的浓度为0.5~1.5μM；步骤二、将固定了捕获DNA的磁珠复悬在Tris‑HCl缓冲液中，加入3’端与捕获DNA的5’端形成平末端的目标DNA片段，杂交结束后进行磁分离并用Tris‑HCl缓冲液反复清洗，其中，所述的目标DNA浓度为0.1nM~10nM；步骤三、杂交后的磁珠复悬在1×TdT缓冲液中，加入TdT、脱氧胸腺三磷酸，催化反应在目标DNA的3’端原位聚合胸腺嘧啶后加热以终止反应；步骤四、再将步骤三中的反应混合物转移到含NaCl的3‑(N‑吗啉基)丙磺酸缓冲液中，加入抗坏血酸钠及硫酸铜溶液后，进行荧光分析；其中，目标DNA的序列为5’‑TGA GGT AGT AGG TTG TAT GGT T‑3’，捕获DNA的序列为5’‑AAC CAT ACA ACC TAC TAC CTC A‑Biotin‑3’。