[发明专利]Y-27632抑制剂在CD44阳性肠干细胞分选中的应用

摘要

本发明涉及Y‑27632抑制剂在CD44阳性肠干细胞分选中的应用，其是以CD44作为标记分选肠干细胞。通过使用Y‑27632抑制剂并结合使用磁珠分选CD44阳性细胞，从而使分离肠干细胞的方法更加便捷，操作更简单。本发明应用膜抗原对隐窝内的肠干细胞进行分选，不伤害细胞结构，而且，采用本发明的分离方法一次可获得充足数量的肠干细胞，为后续应用的开展奠定了物质基础。

主权项

1.Y‑27632抑制剂在CD44阳性肠干细胞分选中的应用，其特征在于，所述应用包括采用含有Y‑27632抑制剂的培养基，还包括使用磁珠进行CD44阳性肠干细胞的分离；具体包括以下步骤：(1)从肠道组织中分离隐窝；(2)制备隐窝单细胞悬液，具体包括：a)将步骤(1)分离的隐窝置于解离培养基中，孵育30‑45min，每10min反复吹打细胞悬液5‑10次，以促进单个细胞从隐窝中释放出来；所述解离培养基为含有1×Glutamax、1×HEPES、1×青链霉素、1×N2 supplement、1×B27 supplement和10μM Y‑27632抑制剂的Advanced DMEM/F12无血清培养基；b)孵育完毕后，过滤悬液，收集滤液并离心，弃掉上清，得到隐窝单细胞悬液；(3)分选隐窝CD44阳性肠干细胞，具体包括：a)向步骤(2)的解离培养基中加入CD44单克隆抗体，孵育25‑30min，离心，洗去残留抗体，重复此步骤一次；b)再次向解离培养基中加入磁珠偶联抗体，孵育15‑20min；c)将己孵育完毕的细胞悬液上样到磁性分离柱，洗脱收集吸附于柱内的细胞，即为CD44阳性肠干细胞。