[发明专利]一种油菜茎基溃疡病菌的检测方法

摘要

本发明提供一种检测油菜茎基溃疡病菌的LAMP‑LFD检测方法，设计了三对LAMP引物FIP、BIP、LF、LB、F3和B3，其中FIP为5’端生物素标记引物，LF为5’端异硫氰酸荧光素FITC标记探针，配制含三对引物和样品模板的LAMP反应体系步骤，对LAMP反应体系进行扩增，然后用LFD检测，并随后进行了特异性和灵敏度评价。结果显示，应用LAMP‑LFD方法对L.maculans基因组DNA检测最低检测线为114fg/μL；特异性验证实验中，用5株相关植物病原菌，链格孢属、龙眼焦腐病菌、镰刀菌属、大豆北方茎基溃疡病菌，大豆南方茎基溃疡病菌和L.maculans作为特异性试验菌株，LAMP‑LFD法检测只对L.maculans呈阳性反应。

主权项

一种LAMP引物组，其特征在于，所述的引物组包含有：F3，序列为TCTCTTGGTTCTGGCATCGA、B3，序列为AAATGTGCTGCGCTCCA、FIP，序列为AAGGGGCGCAATCACCGTT‑ACGCAGCGAAATGCGATA、BIP，序列为TACCCTCAAGCTCTGCTTGGTG‑GCCAATTGTTTCATCGCGAG、LF，序列为CACTGAATTCTGCAATTCACACTAC、LB，序列为TTGGGTGTTTGTTCCACTTGG；所述的FIP的5′端用生物素标记；所述的LF的3′端用FITC标记。