[发明专利]一种牙鲆原始生殖细胞早期追踪、定位方法在审
| 申请号： | 201510289876.7 | 申请日： | 2015-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN104878102A | 公开（公告）日： | 2015-09-02 |
| 发明（设计）人： | 刘清华;李军;王学颖;肖永双 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李颖 |
| 地址： | 266071*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及胚胎期PGCs的定位标记方法，具体的说是一种牙鲆原始生殖细胞早期追踪、定位方法。将收集的牙鲆各阶段胚胎样品经浓度为4％PFA溶液固定；固定后用含50％去离子甲酰胺的PBS溶液于-20℃保存，将上述固定后保存样品去卵膜后进行梯度甲醇脱水、复水；上述复水后各个阶段胚胎样品经用无RNA酶的PBS缓冲液洗涤，62-65℃预杂交2-4h；杂交后将含有牙鲆RNA探针的杂交液加入至各个阶段预杂交后的胚胎样中于62-65℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，进而实现对牙鲆原始生殖细胞早期追踪、定位的标记。本发明解决了传统胚胎原位杂交样品保存后剥除卵黄和卵膜困难的问题，同时解决了显色检测后，背景色过深的问题，简化了操作步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 原始 生殖细胞 早期 追踪 定位 方法 | ||
【主权项】：
一种牙鲆原始生殖细胞早期追踪、定位方法，其特征在于：1)将收集的牙鲆各阶段胚胎样品经浓度为4％PFA溶液固定；固定后用含50％去离子甲酰胺的PBS溶液于‑20℃保存，待用；2)将上述固定后保存样品去卵膜后进行梯度甲醇脱水、复水，待用；3)上述复水后各个阶段胚胎样品经用无RNA酶的PBS缓冲液洗涤，62‑65℃预杂交2‑4h；杂交后将含有牙鲆RNA探针的杂交液加入至各个阶段预杂交后的胚胎样中于62‑65℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，进而实现对牙鲆原始生殖细胞早期追踪、定位的标记。
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