[发明专利]一种基于活体肺切片的抗流感病毒或抗炎药物筛选模型的构建方法及应用

摘要

本发明公开了一种基于活体肺切片的抗流感病毒或抗炎药物筛选模型，其特征在于，包括以下步骤先将病毒感染活体肺切片，再将待检测药物作用于感染了病毒的所述活体肺切片，最后通过检测病毒滴度和相关细胞因子的变化来验证所述待检测药物的效果。本发明还公开了一种该筛选模型的构建方法，该方法包括肺切片的制备、肺切片的厚度优选、神经氨酸酶活性与病毒滴度相关性评价以及炎症因子的选择。通过该发明，构建了一种基于活体肺切片的药物筛选方法，比传统的细胞模型更加符合真实的机体情况，准确有效。

主权项

一种基于活体肺切片的抗流感病毒及抗炎药物筛选模型，其特征在于，其构建的具体步骤包括：(1)肺切片的制备：利用活体鼠肺制备得到不同厚度规格的肺切片样本，以不同编号分别标记，并且所述厚度规格控制为微米量级；(2)肺切片的厚度选择：利用步骤(1)所得到的多个肺切片样本，流感病毒感染后执行冲洗，添加新鲜培养液，并在12小时～72小时之后采集所述肺切片样本的培养基上清；然后，根据所述培养基上清中的流感病毒滴度以及肺切片的厚度规格，选择225μm～275μm的样本作为肺切片样本备用；(3)神经氨酸酶活性与流感病毒活性相关性评价：利用步骤(2)中厚度选择后的肺切片样本，执行流感病毒的感染，并测试感染所引发的流感病毒滴度变化以及相应神经氨酸酶的活性变化，由此确认神经氨酸酶的活性与流感病毒滴度在肺切片样本上具有相关性；(4)炎症因子的选择：用流感病毒感染活体小鼠，1天～7天后检测小鼠体内的多种炎症因子水平；此外，同样利用步骤(2)中厚度选择后的肺切片样本，执行流感病毒的感染，利用肺切片样本上清检测体外的多种炎症因子水平；接着，根据所述多种炎症因子的体内外相关系数，最终选择炎症因子MIP‑3ɑ、RANTES或IP‑10作为评价抗炎药物的指标，同时结合步骤(3)所确认的神经氨酸酶活性，由此完成对所述抗流感病毒及抗炎药物筛选模型的构建过程。