[发明专利]风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物

摘要

本发明提供了一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物。该分离方法包括：对风轮菜地上部分总黄酮类物质进行硅胶柱色谱分离得到第1‑320流分；对第133‑176流分进行硅胶柱色谱分离并经薄层检测合并相同组分得到13个流分，对第231‑260流分及第295‑310流分进行MCI柱色谱分离并经薄层检测合并相同组分分别得到7个和8个流分，对第12‑48流分及第49‑55流分进行羟丙基葡聚糖凝胶柱层析分别得到3个和2个流分；然后依次对上述各组得到的流分进行C18反相高效液相色谱分离得到33种化合物。该方法从风轮菜分离到的黄酮类成分更全面，为其在治疗心血管疾病方面的药物用途奠定了物质基础和理论依据。

主权项

1.一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质；对所述总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离，在所述分离过程中，以体积比为100：5～100：25的氯仿和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分；对所述第1流分至第320流分中的第133‑176流分进行硅胶柱色谱分离，以体积比依次为9:1、4:1、2:1、1:1和1:2的氯仿和丙酮为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到A1至A13共13个流分；然后以体积比为60:40的甲醇和水作为洗脱剂，依次对所述13个流分进行C18反相高效液相色谱分离，分别得到化合物2、3、4、5、8、9、10、14、16、20、26、32和35；对所述第1流分至第320流分中的第231‑260流分进行MCI柱色谱分离，以所述体积比为60:40的甲醇和水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到B1至B7共7个流分；然后依次对所述7个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物6、21、22、28、29、30和33；对所述第1流分至第320流分中的第295‑310进行MCI柱色谱分离，以体积比为60:40的甲醇‑水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到C1至C8共8个流分；依次对所述8个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物11、12、15、17、23、24、27和34；对所述第1流分至第320流分中的第12‑48流分进行Sephadex LH‑20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，并以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后经薄层追踪检测合并相同组分，得到D1、D2和D3共3个流分；对所述D2流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物13和19；对所述D3流分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物25；对所述第1流分至第320流分中的第49‑55流分进行Sephadex LH‑20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18；对所述第1流分至第320流分中的第79‑86流分进行Sephadex LH‑20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物7和31；其中，所述化合物1为洋芹素，所述化合物2为洋芹素‑7‑O‑葡萄糖苷，所述化合物3为洋芹素‑7‑O‑葡糖醛酸苷，所述化合物4为洋芹素‑7‑O‑葡糖醛酸甲酯苷，所述化合物5为羊红膻酯，所述化合物6为洋芹素‑7‑O‑芸香糖苷，所述化合物7为木犀草素，所述化合物8为木犀草苷，所述化合物9为木犀草素‑7‑O‑β‑D‑葡糖醛酸苷，所述化合物10为木犀草素‑7‑O‑β‑D‑葡糖醛酸正丁醇酯苷，所述化合物11为木犀草素‑7‑O‑芸香糖苷，所述化合物12为木犀草素‑7‑O‑新橙皮糖苷，所述化合物13为金合欢素，所述化合物14为金合欢素‑7‑O‑β‑D‑葡糖醛酸苷，所述化合物15为金合欢素‑7‑O‑β‑D‑芸香糖苷，所述化合物16为日本椴苷，所述化合物17为蒙花苷，所述化合物18为柚皮素，所述化合物19为异樱花素，所述化合物20为江户樱花苷，所述化合物21为柚皮素‑7‑O‑芸香糖苷，所述化合物22为柚皮素‑7‑O‑新橙皮糖苷，所述化合物23为香蜂草苷，所述化合物24为枳属苷，所述化合物25为高圣草素，所述化合物26为橙皮素‑7‑O‑葡萄糖苷，所述化合物27为橙皮苷，所述化合物28为圣草次苷，所述化合物29为新北美圣草苷，所述化合物30为5，7，3′，5′‑四羟基二氢黄酮‑7‑O‑新橙皮糖苷，所述化合物31为槲皮素，所述化合物32为山奈酚‑3‑O‑鼠李糖苷，所述化合物33为山奈酚3‑O‑吡喃鼠李糖‑7‑O‑葡萄糖苷，所述化合物34为芦丁，所述化合物35为染料木苷；所述从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质的步骤包括：取风轮菜的干燥地上部分，用水提取得到水提液；将所述水提液进行压缩、干燥，得到水提物；将所述水提物进行大孔树脂层析，以乙醇和水为洗脱剂进行梯度洗脱，得到洗脱物；以及将所述洗脱物进行碱提酸沉法富集，然后精制得到所述总黄酮类物质。