[发明专利]一种表达并纯化可溶性屋尘螨主要过敏原Derp2蛋白的方法在审
| 申请号： | 201510296062.6 | 申请日： | 2015-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN106282213A | 公开（公告）日： | 2017-01-04 |
| 发明（设计）人： | 魏准;于波;曹拓;杨旸;窦侠;张伟 | 申请（专利权）人： | 深圳北京大学香港科技大学医学中心 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/435;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16 |
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| 地址： | 518036 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种在大肠杆菌中高可溶性表达并纯化屋尘螨主要过敏原Derp2蛋白的方法。本方法以大肠杆菌伴侣蛋白触发因子(Trigger Factor，TF)作为融合标签实现了Derp2的高可溶性表达并优化出高效的纯化工艺，用该方法获得的样品纯度高于98％。经验证，纯化的重组Derp2蛋白与天然提取的Derp2蛋白具有一致的二级结构折叠状态，并具有相同的屋尘螨过敏患者血清中特异性IgE结合活性。本发明所使用的融合表达方法能够实现Derp2蛋的可溶性表达，具有融合标签易于切除，重组蛋白表达量高，纯化工艺简单，适合于大规模工业化生产，产物保持天然活性的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 纯化 可溶性 屋尘螨 主要 过敏原 derp2 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种在大肠杆菌中高可溶性表达并纯化屋尘螨主要过敏原Derp2蛋白的方法，包括以下步骤：合成Derp2成熟体基因序列（GenBank登录号FM177223.1），克隆到pCold‑TFM大肠杆菌表达载体（在Derp2 氨基端融合TF标签）；将重组质粒pCold‑TFM‑Derp2转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)，挑选单克隆菌落，16℃ IPTG诱导胞内表达,融合蛋白呈可溶性；收集菌体经超声破碎后采用Ni‑琼脂糖凝胶亲和层析，HRV‑3C蛋白酶消化，凝胶过滤层析和离子交换层析的方法进行纯化，最终得到与天然产物相近的高纯度Derp2蛋白。
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