[发明专利]基质细胞衍生因子结合放射状胶原支架的制备方法及其在骨软骨缺损修复中的应用

摘要

本发明公开了一种基质细胞衍生因子结合放射状胶原支架的制备方法及其在骨软骨缺损修复中的应用，该方法包括采用放射状胶原支架装置制作放射状胶原支架，胶原水溶液的制备和结合SDF-1的放射状胶原支架的制备，本发明提供一种能够促进自体细胞迁移的含SDF-1的放射状胶原支架在骨软骨缺损修复中的应用，其通过两个方面促进了干细胞的迁移，现有的材料多数结构紊乱，而骨软骨缺损是需要能够促进间充质干细胞迁移的材料；本发明明确了含SDF-1的放射状胶原支架制作方法，并实现了体内的功能检验，为含SDF-1的放射状胶原支架的临床应用供了基础。

主权项

 基质细胞衍生因子结合放射状胶原支架的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：步骤一：采用放射状胶原支架装置制作放射状胶原支架将内径为5.0mm，高为20.0mm的圆柱形模具，在‑20℃下冷冻作为冷冻源，在模具的中央设有一直径为1.5mm的塑料圆柱，模具的顶部和底用均为塑料；将胶原水溶液加入模具中，在‑20℃的温度下冷冻，胶原水溶液从模具外向内逐渐结晶成放射状；当整个模具内的胶原水溶液全部结晶完毕时，将模具在‑80℃放置至胶原结晶温度降至‑80℃，将模具真空干燥48~120 小时，获得放射状胶原支架；步骤二：所述胶原水溶液的制备剥取新鲜猪腿的肌腱，去除筋膜和脂肪制成预处理后的肌腱，然后剪成薄片，浸泡于三羟甲基氨基甲烷与乙二胺四乙酸和氯化钠的混合溶液a 中，4℃过夜，取浸泡后的肌腱薄片用蒸馏水冲洗后溶于0.5mol/L 乙酸水溶液中，调节pH 值为1 后加入胃蛋白酶，4℃放置3 天，离心，弃去上层脂肪层，取下层胶原混合物a 用0.5mol/L 乙酸水溶液稀释3 倍体积，纱布过滤，取滤液用等体积的0.9mol/L 氯化钠水溶液配制成混合溶液b，4℃过夜，离心，取下层胶原混合物b 加入1/4 体积的0.5mol/L 乙酸水溶液在4℃溶解过夜后用双蒸水透析，取截留液在‑80℃冷冻干燥后用双蒸水配制成10mg/mL 的胶原水溶液，4℃保存；所述混合溶液a 中三羟甲基氨基甲烷终浓度为0.05mol/L，乙二胺四乙酸终浓度为0.02mol/L，氯化钠终浓度为0.5mol/L；所述胃蛋白酶的用量为100mg 酶/1g 预处理后的肌腱，胃蛋白酶的酶活是3000‑3500NFU/mg步骤三：结合SDF‑1的放射状胶原支架的制备以1：2.5的比例将100ng/ml的SDF‑1溶于浓度为40mg/ml的纤维凝胶缓冲A液中，再与40mg/ml的纤维凝胶B液1：1混合，获得混合液；将混合液注射入放射状胶原支架中心的孔中，混合液在一分钟以内成胶，获得含有SDF‑1的放射状胶原支架。