[发明专利]银耳粗多糖的纯化工艺

摘要

一种银耳粗多糖的纯化工艺，其特征是：对银耳多糖进行提取、分离，并采用DEAE-纤维素和Sephadex G-200进行纯化，得到均一酸性多糖TPP2；以银耳多糖清除羟基自由基能力为指标，对银耳多糖分离纯化的每一步进行跟踪，并研究了酸性多糖TPP2体外抗氧化活性；实验表明银耳酸性多糖TPP2清除羟自由基的作用明显。

主权项

一种银耳粗多糖的纯化工艺，其特征是：一、提取：称取一定量的椴木银耳，将其在70℃的烘箱中烘3h，粉碎成60目，用80%的乙醇浸泡银耳粉末，用减压抽滤将乙醇浸出物除去；然后加水1：10，在70℃条件浸提5h，8000r/min离心30min，取上清液，重复抽提一次，合并两次上清液，即得银耳多糖粗提液，然后浓缩银耳多糖粗提液，搅拌下加入无水醇至终浓度80%，静置2h，离心分离，采用Sevag法除蛋白，获得精制银耳多糖，干燥，称重，并进行清除羟基自由基能力的测定；二、分离纯化：1、DEAE‑Sepharose Fast Flow柱层析，层析柱2.6cm×30cm，介质为DEAE‑Sepharose Fast Flow离子交换纤维素，用蒸馏水平衡，粗多糖上样量200mg，上样体积20ml；流速1.5m/min；蒸馏水洗脱150ml后，以蒸馏水250ml和3mol/c Nacl250ml样度洗脱，采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并多糖洗脱液，透析后冻干，备用；2、SephadexG‑200凝胶过滤柱层析，溶解冻干品10mg于10ml蒸馏水中，层析柱2cm×80cm，介质为SephadexG‑200，用蒸馏水洗脱，流速0.5ml/min；采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并糖峰收集液，冻干，得均一多糖。