[发明专利]rtPASA用于检测棉蚜种群等位基因突变频率的方法在审
| 申请号： | 201510313711.9 | 申请日： | 2015-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN105063179A | 公开（公告）日： | 2015-11-18 |
| 发明（设计）人： | 张靖;芮昌辉;崔丽;徐希宝;任龙;齐浩亮 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100193 北京市海淀区圆明园西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 一种用于棉蚜种群nAChR beta1等位基因突变频率快速检测的rtPASA方法，特异性rtPASA引物设计时，等位特异性下游引物3’端固定于突变位点处，与242位点的碱基配对或错配，同时引物3’端倒数第三个碱基人为错配(G/C)。本发明通过改进在特异性引物中人为引入错配碱基，使其适用于突变位点G/C的检测。然后用设计的引物进行实时荧光定量等位特异性PCR反应，对棉蚜种群等位基因突变频率的检测，本发明的方法可靠，快速、灵敏度高、操作简便易行，实验费用低廉。 | ||
| 搜索关键词： | rtpasa 用于 检测 棉蚜 种群 等位基因 突变频率 方法 | ||
【主权项】：
一种用于棉蚜等位基因点突变快速检测的实时荧光定量等位特异性PCR(rtPASA)方法，依次包括特异性引物设计、普通PCR扩增、实时荧光定量等位特异性反应、标准曲线制备等步骤，其特征在于：所述特异性rtPASA引物设计中，两条特异性下游引物3’端除设计于突变位点处以外，将引物3’端倒数第三个碱基人为错配，降低等位特异性引物扩增效率，提高其扩增的特异性，达到区分等位突变位点的目的。然后用设计的引物进行实时荧光定量PCR反应，用标准品构建标准曲线，用于快速检测未知样本等位基因突变频率。
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