[发明专利]一种生产莽草酸的重组菌株及其制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种生产莽草酸的重组菌株及其制备方法与应用。所述重组菌株自身不包含下述基因：aroK、aroL、tyrR与ptsHIcrr；其ptsHIcrr位点与tyrR位点包含下述基因：aroG、aroB、tktA、aroE、glk、galP和ppsA，所述基因aroG、aroB、tktA、aroE、glk、galP和ppsA转录表达由大肠杆菌内具有活性的启动子驱动，由大肠杆菌内具有活性的终止子终止。所述应用包括：发酵培养所述重组大肠杆菌菌株，获得莽草酸；发酵培养基中葡萄糖与甘油的质量比为1∶5～5∶1。本发明重组菌株莽草酸的发酵产量高，生产莽草酸时无需抗生素及诱导剂，生产成本低，工艺简单。

主权项

1.一种重组大肠杆菌菌株，其特征在于，其自身不包含下述基因：aroK、aroL、tyrR与磷酸烯醇式丙酮酸‑糖磷酸转移酶系统操纵子ptsHIcrr；其操纵子ptsHIcrr位点与基因tyrR位点包含了下述基因：aroG、aroB、tktA、aroE、glk、galP和ppsA，所述基因aroG、aroB、tktA、aroE、glk、galP和ppsA转录表达由大肠杆菌内具有活性的启动子驱动，由大肠杆菌内具有活性的终止子终止；所述重组大肠杆菌菌株的出发菌株通过基因敲除的方法剔除基因aroK、aroL、tyrR与操纵子ptsHIcrr；所述出发菌株为E.coli JW0379‑1菌株；所述基因敲除的方法为通过在所述重组大肠杆菌菌株的出发菌株内表达重组系统进行敲除，所述重组系统为FLP/FRT和/或RED重组系统；在所述ptsHIcrr位点整合有所述基因aroG、aroB、tktA、aroE、glk、galP，在所述tyrR位点整合有基因ppsA；所述基因aroG、aroB、tktA、aroE、glk和galP按该先后顺序排列位于所述ptsHIcrr位点。