[发明专利]一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法

摘要

本发明公开了一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法，步骤如下：a.播种：将青花菜种子浅层播种于穴盘内；b.催芽：将穴盘放置温床上催芽，白天20～25℃，夜间10～15℃；c.定植：待到长出2～3片真叶时，定植栽培于基质营养杯中，定期浇灌营养液MB1；d.低温春化：待到真叶长出14～16片后，在8～15℃下低温春化20天左右，并配合浇灌营养液MB2；e.栽培：待到花球形成后，配合浇灌营养液MB3继续栽培；控制大棚内的环境温度为20～25℃，获得正常花蕾；f.提取小孢子：将选取的花蕾经过消毒、抽提花粉，即可获得小孢子材料。上述无土栽培技术可在冬季的温室大棚内栽培出适合做小孢子材料的花蕾，解决冬季无法正常获得青花菜小孢子技术难题。

主权项

1.一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法，其特征在于：所述方法主要包括以下步骤：/na.播种：在温室大棚中，准备好穴盘，在穴盘中装满栽培基质，并用水浇透，将青花菜种子浅层播种于穴盘内；/nb.催芽：将上述播种有青花菜种子的穴盘放置温床上催芽，催芽温度控制在白天20～25℃，夜间10～15℃；在催芽期间，根据基质干湿情况浇水管理；/nc.定植：待到长出2～3片真叶时，定植栽培于基质营养杯中，并根据基质干湿情况，定期浇灌培养液MB1，控制环境温度和湿度，从而达到满足其营养生长所需条件；所述培养液MB1的具体组成如下：以一立方米水计，其中含有硝酸钾1.6kg、硝酸铵1.4kg、氯化钙0.5kg、硫酸镁0.37kg、磷酸二氢钠2.15kg、肌醇50g、硫酸亚铁28g、乙二胺四乙酸二钠40g、硫酸锰22g、硫酸锌9g、硼酸钠6g、碘化钾1g、甘氨酸2g、钼酸钠0.25g、硫酸铜0.5g、氯化钴0.5g；/nd.低温春化：待到真叶长出14～16片营养生长结束后，控制环境温度在8～15℃，低温春化诱导其进入生殖生长，春化作用20天，期间并配合浇灌培养液MB2；所述培养液MB2的具体组成如下：以一立方米水计，其中含有氯化钾1.05kg、硝酸铵1.5kg、氯化钙0.5kg、硫酸镁0.37kg、磷酸二氢钠2.5kg、肌醇30g、硫酸亚铁28g、乙二胺四乙酸二钠40g、硫酸锰22g、硫酸锌9g、硼酸钠10g、碘化钾1g、甘氨酸2g、钼酸钠0.35g、硫酸铜0.5g、氯化钴0.5g；/ne.栽培：待到花球形成后，根据基质干湿情况，配合浇灌培养液MB3继续栽培；控制大棚内的环境温度为20～25℃，获得正常花蕾；所述培养液MB3的具体组成如下：以一立方米水计，其中含有氯化钾1kg、硝酸铵1.15kg、氯化钙0.5kg、硫酸镁0.37kg、磷酸二氢钠2.9kg、肌醇10g、硫酸亚铁28g、乙二胺四乙酸二钠40g、硫酸锰22g、硫酸锌9g、硼酸钠12g、碘化钾1g、甘氨酸2g、钼酸钠0.5g、硫酸铜0.5g、氯化钴0.5g；/nf.提取小孢子：选取花蕾，将花蕾经过消毒、抽提花粉，即可在冬季获得青花菜的小孢子材料；所述小孢子的提取方法具体包括以下内容：/n(1)选蕾：选取生长良好长度为2.5～3.5mm的主花序花蕾，或者是选取长度为3.5～4mm的侧枝花蕾；/n(2)消毒：将上述选取好的花蕾用酒精消毒30～40S，然后用次氯酸钠消毒10min，最后用无菌水清洗3次，每次5min；/n(3)抽提花粉：将灭过菌的花蕾放置于离心管中，加入1～2mLB5培养液，用玻璃棒研磨使花粉散出，研磨至糊状，在管中加入半吸管B5培养液，倒入过滤器过滤，将滤液盛入10mL的离心管中；加入B5培养液冲洗过滤器中的花粉，冲2～3次后，合并滤液，在10mL离心管中将花粉悬浮液稀释；/n将花粉悬浮液800转/min下离心处理5min；将离心管中的上层清液除去，再加液体B5培养液，并将沉淀的花粉用吸管冲散，再次悬浮离心，除去上清液；/n将沉淀的花粉用NLN-13培养液稀释，稀释后的悬浮液分装入6cm培养皿，每皿加入悬浮液5mL，每mL含花蕾1.5～2个，用封口膜封口，便可得到所需的小孢子材料；该小孢子材料在培养皿内可继续培养成胚状体。/n