[发明专利]一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法

摘要

本发明公开了一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法，属于固态发酵产物分析技术领域，主要适用于白酒固态发酵产物，包括大曲、酒醅、窖泥的酚类化合物的含量测定；具体涉及固态发酵产物的超声萃取、顶空固相微萃取和气相色谱‑质谱联用进行定性、定量分析。本发明建立的方法能够快速检测并准确定量固态发酵产物中10种挥发性酚类化合物，各酚类化合物在所测范围内具有良好的线性关系R2>0.99，检出限均小于10ug/L，相对标准偏差小于10％，回收率为75％～110％；本发明的技术方案简便快速，能实现对固态发酵过程产物中酚类化合物的有效监控，对于提升终产品的品质具有重要意义。

主权项

一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法，其特征在于按如下步骤进行：首先对待测固态发酵产物进行超声萃取、离心取上清液置于顶空瓶中，并加入2,6‑二甲基苯酚内标溶液，通过顶空固相微萃取方式吸附富集目标物，最后通过气相色谱‑质谱联用技术对待测固态发酵产物中所含酚类化合物进行定性、定量分析；具体是按如下步骤进行：(1)超声萃取：称取5.0～10.0g待测固态发酵产物于25mL棕色具塞试管中，加入25mL体积浓度为10～15％的乙醇溶液，旋紧塞子，在避光密闭条件下充分振荡混匀后，超声萃取20～30min，然后采用低温离心方式分离收集上清液，离心温度5～10℃，离心转速8000～10000rpm，离心10～15min；(2)顶空固相微萃取：取8～10mL所述上清液置于20mL顶空瓶中，加入10μL的2,6‑二甲基苯酚内标溶液，立即密闭顶空瓶，轻轻摇匀，然后在50～55℃恒温预热3～5min后，将PA萃取头插入所述顶空瓶中，于50～55℃恒温萃取30～40min；(3)气相色谱‑质谱联用：在顶空固相微萃取结束后，将PA萃取头插入到联有质谱检测仪的气相色谱进样口，230～250℃热解析3～5min；气相色谱条件为：色谱柱为DB‑WAX毛细管柱60m×0.25mm×0.25μm；进样口温度230～250℃，质谱检测器温度230℃，载气He，流速0.8～1mL/min，不分流进样；程序升温条件为初始柱温40℃，以4～5℃/min上升至180℃，保持2～4min,然后以5～6℃/min升温到230℃，保持5～15min；质谱条件为：气相色谱与质谱接口温度为230℃；电离方式为电子轰击源EI；监测方式为选择性离子扫描模式SIM，电离能量70eV；溶剂延迟为20～25min；(4)标准曲线的建立a、配制单标储备液：称取各种酚类化合物标准品，分别用无水乙醇配制成1～2mg/L的单标储备液，采用棕色储液瓶于4℃冰箱中避光保存；b、配制混合标准储备液：吸取各酚类化合物的单标储备液0.5mL混合，然后采用色谱纯无水乙醇定容至50mL棕色容量瓶，获得混合标准储备液，于4℃冰箱中避光保存；c、配制混合标准使用液：分别吸取混合标准储备液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL至50mL棕色容量瓶中，加入乙醇，然后用超纯水定容，配制成乙醇体积浓度为10％～15％的标准系列溶液；d、对各混合标准使用液按步骤(2)进行顶空固相微萃取，然后按照步骤(3)进行分析，以各酚类化合物标准品与内标物特征离子峰的峰面积之比为横坐标，以各酚类化合物标准品与内标物的浓度之比为纵坐标绘制标准曲线；(5)待测固态发酵产物的测定：将待测固态发酵产物按步骤(1)进行超声萃取，按步骤(2)进行顶空固相微萃取，然后按照步骤(3)气相色谱‑质谱联用进行定性定量分析，通过标准曲线计算固态发酵产物中酚类化合物含量；所述酚类化合物包括苯酚、4‑甲基苯酚、4‑乙基苯酚、愈创木酚、4‑甲基愈创木酚、4‑乙基愈创木酚、4‑丙基愈创木酚、4‑乙烯基愈创木酚、2,4‑二叔丁基苯酚和2,6‑二叔丁基苯酚。