[发明专利]一种基于光二极管诱导化学发光测定Ago2蛋白的RNA核酸内切酶活性的方法

摘要

一种基于光二极管诱导化学发光测定Ago2蛋白的RNA核酸内切酶活性的方法，属于化学发光技术领域。首先，制备Ago2‑RNA复合物和P‑FITC修饰MoS₂复合物。然后，将Ago2‑RNA复合物加入到P‑FITC修饰MoS₂的溶液中，反应一段时间后，离心，取部分上层清夜于2mL玻璃烧杯中，并加入20μLpH11.30的4mM的鲁米诺溶液。然后，打开光二极管电源，照射一段时间后关闭电源，然后测定化学发光强度，根据化学发光强度实现Ago2的RNA核酸内切酶活性的测定。本发明方法简单、成本低、灵敏度高。

主权项

1.一种基于光二极管诱导化学发光测定Ago2蛋白的RNA核酸内切酶活性的方法，具体特征包括以下步骤：(a)首先，制备MoS2单层膜，将MoS2粉体分散到得到DMF中，得到MoS2的DMF溶液，将该溶液在室温下超声，然后离心，得到黑色沉淀，最后，收集沉淀物，经过水洗涤，然后再分散于水中，形成溶液；(b)P‑FITC修饰MoS2的制备，将(a)步骤中制得的MoS2与P‑FITC混合均匀，然后加入一定量的Tris‑HCl缓冲液，反应一段时间，然后离心，收集沉淀物，经过水洗涤，然后再分散于水中，得P‑FITC修饰MoS2的溶液；(c)Ago2‑RNA复合物制备，将Ago2样品溶液与含有RNA的Tris‑HCl‑RNasin缓冲液混合，孵化，使得RNA与Ago2蛋白充分结合，得Ago2‑RNA复合物；(d)随后，再将(c)步骤所得的Ago2‑RNA复合物加入到(b)步骤的P‑FITC修饰MoS2的溶液中，反应；(e)将(d)步骤所得的溶液经过离心之后，取部分上层清夜置于小烧杯中，再加入鲁米诺溶液，打开光二极管电源，照射后关闭电源，然后测定化学发光强度，根据化学发光强度实现Ago2蛋白的RNA核酸内切酶活性测定；其中，RNA为5'‑UUG UCU CUG GUC CUU AC‑3’；P‑FITC为3'‑CCC ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG ATG TAG TAG TAG TAA AAA CAG AGA CCA GGA AUG‑FITC‑5’。