[发明专利]一种重组木聚糖酶的制备及其应用于木薯渣降解的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种重组木聚糖酶的制备以及应用该重组木聚糖酶降解木薯渣的方法。本发明将Clostridium clariflavum DSM19732的木聚糖酶基因与质粒pET‑28a连接，转化大肠杆菌BL21，诱导表达，细胞破碎得到重组木聚糖酶，将该酶处理木薯渣，降低了木薯渣中纤维素和半纤维素的含量。用该方法制备的重组木聚糖酶，具有良好的酶学性质，处理木薯渣后可提高木薯渣中木质纤维素的降解效率。

主权项

1.一种重组木聚糖酶应用于木薯渣降解的方法，其特征在于，在20目的木薯渣中加入质量体积比浓度为1％‑3％pH 7.0的Tris‑HCl缓冲液，加入100‑400U重组木聚糖酶液及100‑5000U纤维素酶，55℃恒温48‑96h；所述重组木聚糖酶的制备方法包括以下步骤：1)目的木聚糖酶基因的获得：用细菌基因组DNA提取试剂盒提取含有Clostridium clariflavum DSM19732的基因组，得到基因组DNA溶液；2)重组表达载体的构建：根据数据库中报道的Clostridium clariflavum DSM19732木聚糖酶基因序列设计带有限制性内切酶BamH I和Not I的引物以步骤1)所得基因组DNA溶液为模板，进行PCR扩增，并对扩增产物进行纯化，然后用限制性内切酶BamHⅠ和NotⅠ双酶切已纯化的PCR产物和质粒pET‑28a，用T4连接酶16℃过夜连接，得到重组表达载体；3)重组木聚糖酶的诱导表达：将步骤2)中所得到的重组表达载体转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行培养，诱导重组木聚糖酶的表达；4)诱导木聚糖酶的表达条件：菌体生长OD600值为0.6‑1.6；IPTG诱导浓度为0.05‑1mmol/L；诱导温度为16‑37℃；诱导时间为4‑8h；5)木聚糖酶液制备：收获步骤4)的菌体，8000‑10000rpm离心15‑20min，沉淀用20mmol/L、pH 7.0Tris‑HCl重悬，混匀后超声破碎10min，之后8000‑10000rpm离心15‑20min，取上清即为木聚糖酶液。