[发明专利]一种桔青霉发酵产核酸酶P1的生产方法

摘要

本发明涉及微生物发酵酶制剂领域，具体涉及一种桔青霉发酵产核酸酶P1的生产方法。包括如下步骤：(1)菌种活化；(2)种子制备：按1～2.5％接种量接入种子摇瓶培养基培养；(3)种子罐培养：按0.1～0.5％接种量接入种子罐培养24～28小时，转速50～150rpm，通风比1:0.5～1:1；(4)发酵罐生产：按3～8％接种量接入发酵罐培养100～200小时，转速100～200rpm，通风比1:0.5～1:1.2，其中发酵45～48小时后流加包含氮源、微量元素和碳源的培养基。该法得到核酸酶的酶活水平达3000～4100u/ml，解决了目前核酸酶生产水平低，成本高的问题，具有大规模工业化的价值。

主权项

1.一种桔青霉发酵产核酸酶P1的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）菌种活化：将保藏编号为CGMCC 3.3174的桔青霉（Penicillium citrinum）孢子接入培养基中培养，洗脱得到孢子悬液；（2）种子制备：将孢子悬液按照1%~2.5%重量比的接种量接入种子摇瓶培养基中，置于28~29℃培养20~22小时，得到种子菌液；（3）种子罐培养：按照0.1%~0.5%重量比的接种量，将种子菌液接入装有种子培养基的种子罐中，培养温度29~30℃，转速50~150rpm，通风比1: 0.5~1: 1，培养周期为24~28小时，得到种子培养液；以及（4）发酵罐生产：以发酵培养基15000升计，按照3%~8%重量比的接种量，将种子培养液接入装有发酵培养基的发酵罐中，培养温度29~30℃，转速100~200rpm，通风比1: 0.5~1: 1.2，发酵周期为110~200小时；其中期间，发酵45~48小时后开始补料，流加包含氮源、微量元素和碳源的培养基，直至发酵结束；其中，步骤（4）中，所述流加氮源为蛋白胨，所述微量元素为硫酸锌，所述碳源为蔗糖或者葡萄糖；其中，包含所述氮源和微量元素的培养基的流加速率为0.01~0.04吨/小时，包含所述碳源的培养基的流加速率为0.01~0.05吨/小时。