[发明专利]一种基于原位制备的荧光银纳米簇检测葡萄糖浓度的方法

摘要

一种基于原位制备的荧光银纳米簇检测葡萄糖浓度的方法，属于荧光银纳米簇应用技术领域。在O2存在下，葡萄糖氧化酶(GOx)催化氧化葡萄糖可以生成H2O2，H2O2与Fe2+发生“芬顿反应”产生的自由基用于引发甲基丙烯酸(MAA)聚合，聚合产物聚甲基丙烯酸(PMAA)作为稳定剂可以通过紫外光还原法制备荧光银纳米簇(Ag NCs)，利用获得的纳米簇荧光发射强度与葡萄糖浓度建立定量关系，从而实现对葡萄糖浓度的检测。这种方法制备的Ag NCs粒径均匀且尺寸小于2nm，并且具有很好的橙色荧光发射。该种方法对葡萄糖的检测是一个荧光“turn‑on”的过程，通过优化制备条件，可以获得最优的葡萄糖检测条件。

主权项

一种基于原位制备的荧光银纳米簇检测葡萄糖浓度的方法，具体步骤如下：(1)将D‑葡萄糖水溶液混合于葡萄糖氧化酶GOx和柠檬酸缓冲溶液中，加入去离子水使总体积为400μL，使得D‑葡萄糖的终浓度为225～1200μM，葡萄糖氧化酶GOx的终浓度为5μg/mL，柠檬酸缓冲溶液终浓度为5mM，溶液的pH值为5～6，然后置于30～40℃水浴锅中温育2～3h；(2)在上述步骤(1)的溶液中加入甲基丙烯酸MAA、FeSO4水溶液和柠檬酸缓冲溶液，加入去离子水使混合后的总体积为500μL，使得甲基丙烯酸MAA的终浓度为100～500mM，FeSO4的终浓度为1mM，柠檬酸缓冲溶液的终浓度为10mM，溶液的pH值为2.5～3.5，室温放置20～60min，用分子量为500～1500Da的透析袋透析12～24h；(3)取200μL步骤(2)制得的溶液加入AgNO3水溶液，HAc‑NaAc缓冲溶液，加入去离子水使混合后的总体积为400μL，使得AgNO3的终浓度为20mM，HAc‑NaAc缓冲溶液的终浓度为10mM，溶液的pH值为4.0～5.0，将样品置于波长为302nm的紫外光下辐照2～8分钟，然后在波长为480nm的激发光下测试495～800nm的荧光发射光谱；取荧光发射光谱中荧光发射最强处荧光强度的数值对葡萄糖浓度的对数值作图，建立荧光发射强度与葡萄糖浓度的定量关系曲线；(4)重复步骤(1)～(3)，测量未知浓度的D‑葡萄糖水溶液的荧光发射光谱，将所得荧光发射光谱中荧光发射最强处荧光强度的数值代入步骤(3)的定量关系曲线，从而得到D‑葡萄糖水溶液的浓度。