[发明专利]一种北冬虫夏草深层发酵液中虫草素的提取方法

摘要

本发明涉及一种北冬虫夏草深层发酵液中虫草素的提取方法，包括以下步骤：将北冬虫夏草子实体经清水冲洗，加入乙醚脱脂；配制固体发酵培养基对样品进行发酵培养、过滤，制备样品滤液；将NKA-Ⅱ型大孔树脂采用乙醇浸泡进行预处理；在预处理好的NKA-Ⅱ型大孔树脂中按比例加样品滤液，进行摇床振荡培养，采用乙醇洗脱，对洗脱液在259nm处测定吸光度值，进行虫草素含量的测定。本发明对固态培养基的成分进行了严格优化，使北冬虫夏草菌丝体生长更有利，可明显提高菌丝体中的主要有效成分之一麦甾醇的含量；本发明采用对虫草素的吸附能力最强的NKA-II型树脂作为吸附载体，将吸附时间限定为3-6h，虫草素得率高；整个操作简便，成本低。

主权项

一种北冬虫夏草深层发酵液中虫草素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品前处理：将保藏好的北冬虫夏草子实体5‑10g经清水冲洗，加入乙醚脱脂，再加清水反复冲洗，烘干备用；（2）配制固体发酵培养基：取葡萄糖 2‑5g，玉米粉2‑4g，蛋白胨1‑2g，麦麸2‑4 g，KH₂PO₄ 2‑4g,MgSO₄ 1‑2g，Vitamin B₁ 2‑4g，Vitamin B₂ 3‑6g，培养基中加入蒸馏水，加热煮沸，调节PH，趁热倒入容器中，高压蒸汽灭菌，倒在平板上；（3）发酵培养：将步骤（1）中经样品前处理后的样品接种到步骤（2）中制备好的培养基中，培养完成后取菌种发酵液，经0.45um微孔滤膜过滤，取样品滤液备用；（4）树脂的预处理：将NKA‑Ⅱ型大孔树脂采用乙醇浸泡，除去上浮的树脂碎片，反复浸泡3‑5次，至洗涤液3倍体积水无白色浑浊为止，最后用蒸馏水淋洗直至无乙醇味；（5）称取步骤（4）中预处理好的NKA‑Ⅱ型大孔树脂2‑5g，加入10‑20ml步骤（3）中制备好的样品滤液，进行摇床振荡培养3‑6h，将吸附后的树脂采用清水洗涤3‑5次，采用乙醇洗脱，对洗脱液在259nm处测定吸光度值，进行虫草素含量的测定。