[发明专利]一种催化合成阿扎那韦中间体的方法

摘要

本发明公开了一种催化合成阿扎那韦中间体的方法，包括制备磁性修饰的介孔材料，将羰基还原酶与辅酶共固定化于磁性介孔材料，并用该固定化酶催化(3S)‑3‑(叔丁氧羰基)氨基‑1‑氯‑4‑苯基‑(2R)‑丁酮生成(3S)‑3‑(叔丁氧羰基)氨基‑1‑氯‑4‑苯基‑(2R)‑丁醇中间体。本发明具有羰基还原酶与辅酶的回收利用率高、辅酶再生效率高、成本低、市场前景广阔等优点。

主权项

1.一种催化合成阿扎那韦中间体的方法，其特征在于，具体的合成步骤为：（1）将介孔材料加入到含有(NH4)2Fe(SO4)2.6H2O、NH4Fe(SO4)2.12H2O的水溶液中，用氨水调节pH至11~12，40‑70℃搅拌，获得含有磁性的介孔材料，其中，介孔材料为SBA‑15，介孔材料平均孔径为2‑50 nm，比表面积为500‑1500 m2/g；（2）将步骤（1）中获得的磁性介孔材料加入至乙醇水溶液中，在氩气保护下搅拌，加入冰醋酸至pH维持在3.0‑5.0，向体系中加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)，50‑80℃搅拌24‑36 h，磁性吸附，即得修饰后的磁性介孔材料；（3）将辅酶加入到含羰基还原酶的pH 为6.0‑7.0的磷酸盐缓冲液中，4℃静置0.2‑2 h；其中，辅酶为NAD/NADH或NADP/NADPH，辅酶与羰基还原酶的质量比为1:5‑20；（4）在步骤（3）的溶液中加步骤（2）中制备的修饰后的磁性介孔材料，100‑150 rpm，25℃温浴2‑8 h，得悬浮液，磁性吸附，去上清，磁性固体用生理盐水洗涤，重复2‑4次，得固体即为羰基还原酶与辅酶共固定化酶体系，冷冻干燥后，4℃保存；（5）将底物(3S)‑3‑(叔丁氧羰基)氨基‑1‑氯‑4‑苯基‑2‑丁酮、助溶剂甲苯、异丙醇、共固定化酶及pH 8.0‑8.5为三乙醇胺的缓冲液加入到反应器中，100‑150 rpm搅拌， 30‑40℃保温反应，转化率>99%，反应结束；其中，底物初始浓度为50‑200 mg/ml，助溶剂用量为总反应体积的5‑20%，共固定化酶、异丙醇、底物的投料质量比为0.05‑0.1:0.3‑0.5:1；（6）通过磁性吸附从步骤（5）的反应液中回收步骤（4）所述的共固定化酶体系；（7）分离纯化所述步骤（5）的反应液，获得产物(3S)‑3‑(叔丁氧羰基)氨基‑1‑氯‑4‑苯基‑(2R)‑丁醇。