[发明专利]黑素细胞免疫组化苏木素—甲苯胺蓝双重复染法

摘要

黑素细胞免疫组化的苏木素—甲苯胺蓝双重复染的方法⑴.切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水⑵.阻断灭活内源性过氧化物酶⑶.抗原修复；⑷.血清封闭；⑸.滴加一抗；⑹.滴加二抗；⑺.DAB显色；⑻.苏木素复染，盐酸酒精分化；⑼.甲苯胺蓝工作液复染，冰醋酸分化；⑽.脱水透明后封片。本发明的阳性颗粒复染后仍为棕黄色，组织内原有黑素颗粒变为墨绿色，区别明显，易于与棕色颗粒区分，且不影响苏木素的显色，背景细胞细胞核清晰可见，免疫组化阳性棕黄色颗粒、墨绿色黑素颗粒、蓝色胞核三者色差明显，便于直观区分。甲苯胺蓝染液配制起来简单方便。

主权项

一种黑素细胞免疫组化的苏木素—甲苯胺蓝双重复染的方法，其特征在于，步骤如下：⑴. 切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各30min，无水乙醇、95%、90%、85%梯度酒精各3 min，自来水洗净；⑵. 阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS缓冲液清洗5min×3次；⑶. 抗原修复；⑷. 血清封闭：山羊血清37℃孵育10min，倾去勿洗；⑸. 滴加一抗，PBS代替一抗作为阴性对照，4℃孵育过夜；⑹. PBS缓冲液清洗5min×3次；⑺. 滴加二抗，室温避光孵育20min；⑻. PBS缓冲液冲洗5min×3次；⑼. 配置DAB显色液，将显色液滴至切片上，常规显色；所述显色液的配置操作是：取蒸馏水1ml，依次滴加DAB试剂盒中的A、B、C各1滴，混匀；⑽. 蒸馏水漂洗5min×3次；. 苏木素复染1min，1%盐酸乙醇分化，自来水清洗，温水反蓝；⑿. 甲苯胺蓝工作液复染20‑30min，1：500冰醋酸分化至显微镜下黑素颗粒呈现墨绿色，需2min，自来水清洗；染液配制：将1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水中，即得到甲苯胺蓝原液；甲苯胺蓝工作液是将甲苯胺蓝原液用PBS缓冲液按1:20稀释配成，现用现配；⒀. 脱水透明后封片；步骤⑴切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水的具体操作是：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各30min，无水乙醇、95%、90%、85%梯度酒精各3 min，自来水洗净；步骤⑵阻断灭活内源性过氧化物酶的具体操作是：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS缓冲液清洗5min×3次。