[发明专利]基于纳米均相时间分辨荧光免疫与液滴微流控技术的检测生物大分子的方法

摘要

本发明属于微流控芯片领域，涉及一种检测生物大分子方法，本发明中将Alpha‑LISA技术与droplet‑based microfluidics技术联合优化制备微流控芯片液以及提供一种新的高灵敏度的生物大分子检测方法；本发明中采用三相混合技术，利用被动混合结构使反应液充分混匀，并采用十字聚焦形成液滴，使生成的液滴体积更小，反应更为迅速；以及对样品浓度要求低，反应特异、灵敏、快速、充分，并无需反应后清洗，可检测完整蛋白质、酶复合体、噬菌体等非常复杂的复合物，本方法能克服现有商业化液相芯片的技术瓶颈，实现对于临床生物大分子的快速检测，且能提高检测灵敏度及特异度，降低对样本量的需求。

主权项

1.基于纳米均相时间分辨荧光免疫与液滴微流控技术的检测生物大分子的方法，其特征在于，其包括：利用微流控芯片将生物大分子与Alpha‑LISA供体受体微珠之间的液—液独立反应体系离散成约105个纳升级乳液，每个乳液在管道内流动并进行反应，在出口处被探测器检测：按下述步骤：1）开启微流控芯片油相阀门，待5min油相充满反应管道；2）开启微流控芯片液相阀门，在制得的三个液相通道中分别加入：①待测血浆样品或标准品、②以分析缓冲液稀释的已连接抗体的受体微球，及缓冲液稀释的生物素化抗体、③链霉亲和素化的供体微球；3）三相液体汇合后，在被动混合结构中进一步混合与反应，当混合液体流至被动混合结构末端遇油相形成液滴微反应器，并在反应管道中进一步反应；4）当液滴流至荧光检测装置时，使用680nm光激发，检测每个微反应器中的615nm发射光，后将每个液滴的发射光信号叠加，通过信号叠加强度计算待测生物大分子的浓度，余液经废液管排出。