[发明专利]一种肺癌辐射抗性细胞株的构建方法

摘要

本发明公开了一种肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，该方法包括以下步骤：肺癌细胞常规培养至对数生长期时，接种于六孔板中，把六孔板置于照射野中心，六孔板底面覆盖1.5cm厚的组织等效填充物，6MV-X线垂直入射，剂量率300cGy/min，源皮距100cm，依次给予2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy照射，每剂量均照射2次，总剂量达60Gy，继续培养及传代5代以上至细胞形态、增殖稳定，冻存备用。本发明照射次数少，构建时间短，细胞污染几率小，优于小剂量等分割照射法；集落形成实验结果表明采用本发明构建肺癌辐射抗性细胞株的辐射抗性高于亚致死剂量照射法。

主权项

一种肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：①将肺癌细胞置于37℃、5％CO₂培养箱内常规培养，当其覆盖培养瓶60～70％并处于对数生长期时，接种于六孔板中，把六孔板置于照射野中心，六孔板底面覆盖1.5cm厚的组织等效填充物，照射源为医用直线加速器，6MV‑X线，机架旋转180°，在室温条件下射线从下方垂直入射，剂量率300cGy/min，源皮距SSD＝100cm，第1次予以2Gy照射；②照射后更换新鲜培养基，待细胞覆盖培养瓶80％以上时，胰酶消化，传代两次以上；③传代后置于37℃、5％CO₂培养箱内培养2～3天，待细胞再次覆盖培养瓶60～70％后，再次给予2Gy照射；④每一次照射后的细胞均按上述步骤②和步骤③的方法传代并培养至稳定状态后再进行照射，依次增加照射剂量达4Gy、6Gy、8Gy和10Gy，每剂量均照射2次，总剂量达60Gy，继续培养及传代5代以上至细胞形态、增殖稳定，冻存备用。