[发明专利]重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒有效
| 申请号： | 201510371359.4 | 申请日： | 2015-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN105039388B | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 李正和;王强;马晓楠;钱莎莎;孙凯;周雪平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/84;C12N7/01 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林松海 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒。在植物细胞中导入质粒载体的混合物，包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码单链负义植物病毒反基因组的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述单链负义植物病毒衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白，和（iii）可以抑制植物体内基因沉默的沉默抑制子蛋白的多核苷酸序列的一种或多种分离的核酸分子。质粒载体组合物导入植物细胞后可以大量产生重组植物负链RNA病毒；侵染性克隆能高效侵染至少一种以上的植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；利用侵染性克隆可有效用于植物负链RNA病毒的反向遗传学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 单链负义 植物 病毒 侵染 克隆 构建 方法 质粒 | ||
【主权项】：
1.一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法，其特征在于：在植物细胞中导入质粒载体的混合物，所述混合物包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码属于植物弹状病毒的苦苣菜黄网病毒（SYNV）的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述SYNV衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白的多核苷酸序列，和（iii）另一种表达载体，包含烟草蚀纹病毒Hc‑Pro基因、番茄丛矮病毒的p19基因和大麦条纹花叶病毒gb基因的多核苷酸序列；所述的质粒载体导入植物细胞的过程是在足以实现所述的所有质粒载体同时转录或共表达和产生重组病毒的条件下进行的。
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