[发明专利]一种检测农药阿特拉津残留的量热仿生竞争检测方法

摘要

本发明涉及一种检测农药阿特拉津残留的量热仿生竞争检测方法，属于生物传感器领域，用于快速检测食品或水源样品中的农药阿特拉津残留，将S‑MIP作为识别元件填充于反应柱。将待测样品经简单前处理后在流动相下与一定量的β‑内酰胺酶标记的待测物竞争结合S‑MIP上的印迹位点。加入酶特异性底物释放的热信号与待测物含量呈反比。在优化实验条件的基础上建立标准曲线。“放大法”特异、定量检测典型农药阿特拉津的量热仿生传感方法，具有样品前处理简便、灵敏度高、特异性强、定量检测的优点。

主权项

1.一种检测农药阿特拉津残留的量热仿生竞争检测方法，其特征是量热传感器反应柱内固相载体所填充的表面印迹材料为通过以甲基丙烯酸为功能单体的表面印迹技术在氨基化修饰的可控有孔玻璃珠表面印迹的针对阿特拉津的特异性印迹层产物；该检测方法包括以下步骤：步骤1：S‑MIP的制备(1‑1)将2.85g阿特拉津溶于100ml N,N‑二甲基甲酰胺乙酸缓冲液混合溶液,在机械搅拌的条件下使其完全溶解；其中，N,N‑二甲基甲酰胺∶乙酸缓冲液＝9∶1，v/v；乙酸缓冲液的浓度为0.2mol/L，pH为5.8；(1‑2)依次将5.635ml甲基丙烯酸、1.46g亚甲基双丙烯酰胺及400mg可控有孔玻璃珠加入步骤(1)的混合溶液中，形成印迹预聚合体系；(1‑3)38℃水浴，搅拌子转速300rpm条件下体系预聚合12h；(1‑4)预聚合体系通入氮气30min，加入过硫酸铵引发接枝印迹聚合，反应10h；(1‑5)经砂芯漏斗通过真空抽滤将产物从体系分离；(1‑6)用50％甲醇水溶液，pH 8～9，含1mol/L NaCl的再生液37℃条件下对产物再生24h，期间每8h更新再生液1次；制备得到的表面印迹产物用乙醇冲洗后在真空干燥箱烘干备用；步骤2：MIP量热法检测阿特拉津(2‑1)将表面印迹产物装入反应器置于热调节器中，通入经0.22μm针式滤器过滤及超声除气的载液平衡流动体系，体系流速为1000μl min^‑1；载液为0.02mol L^‑1pH 5.8的乙酸‑乙酸钠缓冲液，其添加剂DMF含量为2％；(2‑2)用载液为溶剂配制0‑20ng mL^‑1梯度浓度的阿特拉津溶液，与一定量β‑内酰胺酶标记的阿特拉津混合制备成样品溶液；β‑内酰胺酶标记的阿特拉津的稀释比为1:400；(2‑3)经0.22μm针式滤器过滤后，加入样品溶液，阿特拉津与β‑内酰胺酶标记的阿特拉津在流动相下竞争结合S‑MIP表面的印迹孔穴，多余的样品随流动相冲洗出反应柱；检测体系温度为30℃；(2‑4)加入4mmol L^‑1特异性底物氨苄西林，所产生的热信号变化被惠斯通电桥收集、转化后在量热工作站上以峰信号显示；(2‑5)检测结束后，通入1mol/L NaCl的50％甲醇水溶液，2min，进行再生。