[发明专利]一种L‑瓜氨酸分离纯化的方法

摘要

本发明涉及一种L‑瓜氨酸分离纯化的方法，包括以下步骤(1)鸟氨酸纯化液的获得；(2)瓜氨酸纳滤透析液的获得；(3)瓜氨酸脱色液的获得；(4)瓜氨酸脱氨后的预浓缩液的获得；(5)瓜氨酸结晶物质的过得。本发明采用膜分离、纳滤脱色、膜浓缩等先进处理工艺节省了能耗，节省了活性炭的用量，减少了对环境的污染，降低了生产成本，提高了产品质量。

主权项

一种L‑瓜氨酸分离纯化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)离子交换：将L‑瓜氨酸转化液经氨型732树脂吸附后用水反洗树脂至流出液清澈，用1.0N氨水洗脱，洗脱液再过流D335‑OH型树脂除去阴离子杂质得到瓜氨酸纯化液；(2)纳滤：采用600‑800分子量纳滤膜过滤瓜氨酸纯化液得到瓜氨酸纳滤清液，用3倍浓缩液体积的去离子水分3次清洗纳滤浓缩液后，弃去浓缩液，收集含瓜氨酸产品的纳滤透析液；(3)调pH、脱色：用盐酸调节瓜氨酸纳滤清液的pH至4.5，用活性炭进行脱色，活性炭的用量为瓜氨酸纳滤清液质量的0.5％，脱色温度为50℃，脱色时间为30min，用0.22μm滤膜过滤得脱色液；(4)反渗透浓缩：将瓜氨酸脱色液经反渗透膜浓缩至原体积一半得到瓜氨酸脱色后的预浓缩液；(5)浓缩结晶：将预浓缩液在真空度≥0.095，蒸发温度50℃条件下浓缩至浓缩度含量≥80％的浓缩液，将浓缩液放至5℃冰箱保温2h得到瓜氨酸结晶；所述L‑瓜氨酸转化液的制备方法如下：(1)底物的获得：将精氨酸陶瓷膜过滤液经732氨型树脂吸附，用2.0N氨水洗脱，得到精氨酸阳柱纯化液；(2)转化培养：将含有精氨酸脱亚胺酶的菌体,用生理盐水洗涤1次，离心后收集菌体；将菌体转移到转化液中，转化液包括0.45mol/L的醋酸缓冲液和0.5g/L的十六烷基三甲基溴化铵，加入10％的L‑精氨酸纯化液，37℃保温24h，即得L‑瓜氨酸转化液；所述精氨酸脱亚胺酶菌体的制备步骤如下：(1)斜面培养：将菌株MQO‑153在无菌条件下接种到斜面培养基上进行培养，培养温度为30℃，培养时间为24h；(2)扩大培养：从步骤(1)的斜面培养基上挑取菌落，加水稀释获得菌体溶液，稀释后的浓度为3×105‑5×105个/mL，将菌体溶液接种到种子培养基上，将种子培养基置于摇床中进行扩大培养，接种量为10％，扩大培养的温度为30℃，培养时间为18h，摇床转速为100r/min，摇床振幅为85mm；(3)发酵培养：将扩大培养后的菌体接种到发酵液体培养基中，接种量为10％，接种时菌体溶液的浓度为3×105‑5×105个/mL，培养条件为：培养温度30℃，培养时间28小时，摇床振幅85mm，0‑10h，摇床转速100r/min，10‑20h，摇床转速120r/min，20‑28h，摇床转速100r/min；(4)30L发酵罐培养：将步骤(3)中发酵培养后的发酵液接种到30L发酵罐的培养基中，接种量为10％，接种时菌体溶液的浓度为3×105‑5×105个/mL，控制罐压强为0.05MPa，在30℃条件下培养24小时，搅拌转速600‑800rpm，风量1：0.8m3/m3·min，控制溶氧量为30‑40％，全程用无菌饱和氨水控制pH6.7‑7.0，中途补糖控制残糖为1％，放罐残糖为0％，发酵后得含有精氨酸脱亚胺酶菌体；所述菌株MQO‑153的保藏编号为CGMCC No.10726；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏日期为2015年4月21；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌株MQO‑153的分类命名为粪链球菌Streptococcus faecalis。