[发明专利]DNA标签序列及测序文库构建方法和试剂盒

摘要

本发明涉及一种DNA标签，以及来5’末端连接有该DNA标签的PCR引物对，本发明还提供了由所述DNA标签和PCR引物对组成的构建测序文库的方法和试剂盒。本发明所提供的DNA标签与扩增引物形成一个特异性、灵敏度和重复性之间达到优化、平衡的检测产品，一次可以检测1‑20个不同来源的样品，能够准确区分各种样本来源的碱基序列，本发明所述的高通量测序与测序法的吻合率高达100％。

主权项

1.一种DNA标签序列，其特征是，包含二十条序列，每条序列由6-8个碱基组成、且i)标签序列中不含有3个以上碱基的重复序列；ii)标签序列的GC含量在40％～60％之间；iii)标签序列与扩增引物组合成标签引物后，内部不存在发卡结构或二聚体等二级结构；iv)不同的标签序列之间不存在非特异性结合，v)标签序列中不含有与扩增引物相似度大于80％的序列；vi)标签引物之间不形成二聚体、不存在错配、与PCR产物之间均不存在非特异性结合；所述DNA标签序列选自SEQ ID NO:41-S EQ ID NO:60中的二十条；或者，所述DNA标签序列其选自SEQ ID NO:21-SEQ ID NO:40中的二十条；或者，所述DNA标签序列选自SEQ IDNO:1-SEQ ID NO:20中的二十条；所述扩增引物选自SEQ ID NO:61和62，SEQ ID NO:63和64、SEQ ID NO:65和66、SEQ IDNO:67和68中的至少两对。