[发明专利]山羊角中寡肽成分治疗痛经活性分析方法

摘要

山羊角中寡肽成分治疗痛经的活性研究方法，属于生物技术研究技术领域，包括山羊角寡肽成分的制备，山羊角150℃烘烤品寡肽成分的制备，山羊角200℃烘烤品寡肽成分的制备，收集山羊角蛋白水解液上清液冷冻干燥，获得山羊角酶解寡肽冻干粉备用；统计时间段内子宫平滑肌条平均收缩张力、收缩频率以及收缩曲线下面积，计算出抑制率，分析山羊角寡肽对缩宫素和KCl溶液引起子宫收缩的抑制作用，得出研究结果。本发明通过制备离体大鼠子宫肌条，观察缩宫素、KCl溶液存在的条件下山羊角寡肽成分对子宫平滑肌收缩的影响，进而验证不同山羊角寡肽成分治疗痛经的作用。

主权项

山羊角中寡肽成分治疗痛经活性分析方法，其特征是：包括以下步骤，步骤一、取山羊角生品80g，进行粉碎至粒径为60目，取山羊角生品质量10倍量的蒸馏水，添加至粉碎后山羊角生品中，在4℃的条件下，搅拌2次，每次持续10小时，转速为3600r/min，离心10分钟后，取上清液；步骤二、将所述步骤一中获得的上清液经过双层滤油纸虑取后，经过0.45μm滤膜微滤、1KDa、10KDa超滤膜超滤，采用超滤分离纯化方法得到原子质量大于10KDa的山羊角蛋白、原子质量1KDa～10KDa山羊角多肽、原子质量小于1KDa山羊角寡肽，取原子质量小于1KDa山羊角生品寡肽成分，冻干备用；步骤三、取山羊角生品粉末置于150℃的马福炉中烘烤1小时后取出，呈微黄色，经过降温和粉碎后，得到颗粒直径小于60目的粉末，获得150℃烘烤品；步骤四、取所述步骤三中获得的150℃烘烤品80g，重复所述步骤一和步骤二的操作，得到山羊角150℃烘烤品寡肽成分，冻干备用；步骤五、取山羊角生品粉末置于200℃的马福炉中烘烤1小时后取出，呈黑棕色，经过降温和粉碎后，得到颗粒直径小于60目的粉末，获得150℃烘烤品；步骤六、取所述步骤三中获得的200℃烘烤品80g，重复所述步骤一和步骤二的操作，得到山羊角200℃烘烤品寡肽成分，冻干备用；步骤七、取所述步骤二中原子质量大于10KDa的山羊角蛋白冻干粉80g，按照料液质量比1:10加入蒸馏水搅拌至溶解，经过100℃水浴加热15min，待水温自动降至60℃，置于恒温磁力搅拌器内，在保持60℃的条件下搅拌，添加0.5mol/L NaOH溶液和HCl溶液，将PH值调节至7.5，加入3％碱性蛋白酶进行水解，水解过程中以0.5mol/L NaOH溶液和HCl溶液维持水解液pH值保持7.5恒定，每隔30分钟调适一次pH值，水解过程为4h，水解结束后，转入沸水浴中煮沸10分钟进行灭酶，冷却至室温，以3600r/min的转速离心20min，收集上清液冷冻干燥，获得山羊角酶解寡肽冻干粉备用；步骤八、取24小时前皮下给药注射雌激素增敏的当即死亡野生褐生大鼠的变种SD大鼠子宫，置于盛有洛氏液的培养皿中，剥离附着于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织后，将子宫壁悬挂于盛满洛氏液的麦氏浴槽中，子宫壁的一端固定在浴槽内T形钩上，另一端与肌肉张力换能器连接，调节螺母加1.0g负荷，在保持温度恒定为37℃的条件下供氧，统计时间段内子宫平滑肌条平均收缩张力、收缩频率以及收缩曲线下面积，计算出抑制率，选取给药处理前10min内的子宫平滑肌条收缩力、收缩频率以及收缩曲线下面积；步骤九、将所述步骤八中获得的子宫平滑肌条在洛氏液中平衡10min，静止至子宫收缩稳定，预先记录10min正常收缩曲线，加入缩宫素注射液0.5mL，引起子宫平滑肌条剧烈收缩，作用5min后，加入浓度为5.5mg/mL的山羊角寡肽，观察并记录此后0min～10min、10min～20min、20min～30min内子宫平滑肌条收缩性的变化；分析山羊角寡肽对缩宫素引起子宫收缩的抑制作用，采用t检验方法统计给药前及给药后子宫收缩力平均值；步骤十、将所述步骤八中获得的子宫平滑肌条在洛氏液中平衡10min，静止至待子宫收缩稳定，预先记录10min正常收缩曲线，加入浓度为60mmol/L的KCl溶液引起子宫平滑肌条剧烈收缩，作用5min后，加入浓度味5.5mg/mL的山羊角寡肽，观察并记录此后0min～10min、10min～20min、20min～30min内子宫平滑肌条收缩性的变化；分析山羊角寡肽对KCl溶液引起子宫收缩的抑制作用，采用t检验方法统计给药前及给药后子宫收缩力平均值；步骤十一、对比步骤九和步骤十获得的给药前及给药后子宫收缩力平均值，得到山羊角中寡肽成分治疗痛经的活性分析结果。