[发明专利]一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法

摘要

本发明公开了一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，属于核酸分析领域。本发明结合杂交链聚合反应和卟啉沟槽嵌入技术制备了卟啉-dsDNA长链聚合纳米级高效仿生催化剂，利用该催化剂催化4-氯-1-萘酚和双氧水的氧化还原沉积反应，得到显著的SPR增强信号。本发明检测核酸时具有灵敏度高、价格低廉、制备简单、稳定性和重复性好等优点。

主权项

一种基于表面等离子体共振技术的核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)先以EDC和NHS的缓冲液活化的羧基化的SPR芯片表面，再用缓冲液配制氨基末端的cDNA序列为5’‑NH2‑TCA GCG GGG AGG AAG GGA GTA AAG TTA ATA‑3’溶液，将氨基末端的cDNA溶液加入SPR芯片表面，将cDNA以酰胺反应组装在SPR芯片表面，乙醇胺封闭界面作为传感界面对目标核酸的进行检测；(2)加入目标DNA序列为5’‑TCA GCG GGG AGG AAG GGA GTA AAG TTA ATA‑3’缓冲液与传感界面进行杂交反应得到Au/cDNA/目标DNA组装层，实现对目标DNA的结合捕捉，完成检测步骤；(3)用缓冲液分别配制序列为5’‑CTT CCT CCC CGC TGA CAA AGT TCA GCG GGG‑3’的颈环DNA H1溶液和序列为5’‑TCA GCG GGG AGG AAG CCC CGC TGA ACT TTG‑3’的颈环DNA H2溶液，溶液浓度均为5～10μM，将两种溶液混合后加热至90～95℃，维持5～10分钟，再迅速用冰水浴冷却至室温，即可完成杂交链循环反应形成长链dsDNA，将其与步骤2得到Au/cDNA/目标DNA组装层反应Au/cDNA/dsDNA组装层，在加入铁卟啉的缓冲液形成Au/cDNA/铁卟啉‑dsDNA仿生催化剂；(4)配制10～30mM 4‑氯‑1‑萘酚乙醇溶液，再取1～2mL 4‑氯‑1‑萘酚乙醇溶液与6～8mL缓冲液和2～5μL双氧水混合均匀作为信号放大液，加入步骤3得到的Au/cDNA/铁卟啉‑dsDNA仿生催化剂表面进行氧化还原沉积反应，用SPR仪记录其信号响应。