[发明专利]一种多倍体新疆薰衣草植株的培育方法

摘要

本发明涉及一种多倍体新疆薰衣草植株的培育方法。该方法利用新疆薰衣草优选优株的无菌苗茎段为材料，通过在培养基中加入不同浓度秋水仙素进行诱导处理，使植株加倍后，再运用倍性体鉴定技术进行鉴定，获得多倍体的新疆薰衣草植株。该方法提供了诱导多倍体植株的最佳秋水仙素浓度、处理时间、处理温度以及用于倍性鉴定的方法。通过本发明所述方法可快速实现对新疆薰衣草多倍体植株的新品种选育，缩短育种周期，进而有效提高新疆薰衣草优质种苗的培育速率，克服新疆薰衣草在长期种植过程中及常规育种中易出现的种质退化问题。

主权项

一种多倍体新疆薰衣草植株的培育方法，其特征在于按下列步骤进行：a、选择健壮的薰衣草植株茎尖，用浓度为5%的洗衣粉水溶液搅动洗涤,流水条件下冲洗2‑4h, 晾干后放置备用；b、将步骤a中清洗好的茎尖置于浓度75%的酒精溶液20%+0.1%升汞溶液80%+吐温80 2‑3滴混合液中消毒7min, 再用无菌水冲洗4‑5次,用灭菌滤纸吸干水分后,接种于MS+BA1.0mg/L固体培养基中进行无菌苗诱导培养；    c、将步骤b中萌发生长的无菌苗切茎段后，接种于含有浓度为2%二甲基亚砜和浓度为0.20%秋水仙素的诱导固体培养基MS+BA1.0mg/L上处理1‑3d，培养温度25℃，光照强度2000LX，光照时间12h；    d、将步骤c中处理过的茎段及时转入MS+BA1.0mg/L+IBA0.3mg/L的增殖固体培养基中，培养25d，培养温度24℃，光照强度2000LX，光照时间12h；    e、将步骤d中增殖的苗切成3‑4芽一丛，转接至1/2MS+NAA0.5mg/L生根培养基中进行生根培养，培养温度24℃，光照强度3000LX，光照时间16h；    f、将步骤e中生长的植株生长到3‑4cm，根长出0.5‑1cm时，与二倍体对照植株做对比分析，根据二者在外观形态叶片宽度、厚度、茎粗度及气孔保卫细胞的大小和密度的差异，初步筛选出多倍体植株；    g、随机剪取步骤f中初步筛选的植株幼嫩的根尖组织4‑6mm，在温度4℃条件下，用0.002mol/L^‑1的8‑羟基喹啉预处理4h或饱和对二氯苯水溶液预处理，于温度4℃条件下用卡诺固定液95%乙醇:冰醋酸体积比=3:1固定24 h，弃去固定液，根尖置于温度60℃水浴锅中用1 mol·L^‑1的盐酸水解9 min，冲洗干净解离液，用改良苯酚品红溶液染色20 min，压片观察统计根尖染色体，染色体多于对照植株的一倍确定为多倍体植株，或用流式细胞仪进行倍性分析，确定多倍体植株；     i、将步骤g中经检测培育的多倍体植株洗去根部附着的残留培养基，定植于草炭土∶珍珠岩＝2∶1的温室苗床上，栽培完浇透水，喷施50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液进行消毒后，搭建小拱棚，覆上薄膜，每天通风1‑2次，通风时间由10min逐渐增加至全天，揭膜前不用再浇水，只是在通风时稍喷一些清水在叶面上，20‑25d后逐渐撤去薄膜，进行种苗正常管理，移栽成活率90%。