[发明专利]一种待检菌生物被膜形成能力的定量检测方法有效
| 申请号： | 201510396239.X | 申请日： | 2015-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN105039493B | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 马丽娜;刘永生;李学瑞;周建华;王立燕 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人： | 吕玉博 |
| 地址： | 730000 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明提供一种待检菌生物被膜形成能力的定量检测方法，待检菌生物被膜形成培养完成后，除去培养物，用灭菌蒸馏水洗涤，弃去洗涤液后，固定；加入结晶紫染色；用灭菌蒸馏水洗涤2‑3次，干燥；加入乙醇，室温静置或轻微振荡后，检测595nm处的光密度值，以阴性对照的均值加上阴性对照均值标准差为阈值A0，待检菌重复光密度值的平均值A为生物被膜定量值,对两个值进行比较来定量确定待检菌生物被膜形成能力的强弱。应用本发明的方法不但能够有效定量强生物被膜形成菌株，而且对生物被膜形成弱和生物被膜形成疏松的菌株也具有良好定量效果。 | ||
| 搜索关键词： | 生物被膜 灭菌蒸馏水 定量检测 阴性对照 菌株 洗涤 结晶紫染色 均值标准 室温静置 培养物 洗涤液 乙醇 振荡 疏松 强弱 检测 重复 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于非诊断目的的待检菌生物被膜形成能力的定量检测方法，所述待检菌为副猪嗜血杆菌，其特征在于：待检菌生物被膜形成培养完成后，除去培养物，用灭菌蒸馏水洗涤，弃去洗涤液后，80℃固定30min；加入0.1%结晶紫染色；用灭菌蒸馏水洗涤2‑3次，室温自然干燥30min；加入95%乙醇，室温静置或轻微振荡后，用酶标仪检测595nm处的光密度值，以阴性对照的均值加上3倍阴性对照均值标准差为阈值A0，待检菌重复光密度值的平均值A为生物被膜定量值, 待检菌生物被膜形成强弱按如下标准判定：A≤A0 : 无生物被膜形成菌；A0＜A≤2×A0: 弱生物被膜形成能力菌株；2×A0＜A≤4×A0: 中等生物被膜形成能力菌株；A＞4×A0: 强生物被膜形成能力菌株。
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