[发明专利]一种增强CTL免疫反应的DC细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种增强CTL免疫反应的DC细胞培养方法，该方法采用sh‑RNA去除蛋白质泛素化修饰途径中的Ube1L的表达，有效地提高了DC细胞对肿瘤抗原的呈递能力；发挥更有效地体内杀伤肿瘤的能力；该方法采用临床级别无血清培养基进行DC细胞的培养，同时通过加入1％人血白蛋白和改变细胞因子的剂量配比，将培养时间缩短到4天，减少了时间、空间和人员占有率；该方法调整了促熟细胞因子组合的种类和剂量，使获得的成熟DC细胞能够更有效地促进CD8+CTL细胞增殖，从而提高了抗肿瘤的疗效。

主权项

1.一种增强CTL免疫反应的DC细胞培养方法，其特征在于，包括以下几个步骤：1)采集血液，制备贴壁单核细胞；2)贴壁单核细胞的诱导分化用含1％人血白蛋白的无血清培养液重悬贴壁单核细胞，调整贴壁单核细胞的浓度为1～2×106/mL，加入400～1000PFU /细胞量的Ube1L sh‑RNA慢病毒于37℃， 5％体积浓度的CO2培养箱中孵育2小时后，更换新鲜的1％人血白蛋白的无血清培养液，并加入终浓度为50～100ng/mL的细胞因子GM‑CSF和15～50ng/ml的细胞因子IL‑4，于37℃， 5％CO2培养箱中培养72h，收集细胞进行流式检测；培养第72h，半量补充新鲜的1％人血白蛋白的无血清培养液和终浓度为50～100ng/mL的细胞因子GM‑CSF和15～50ng/ml的细胞因子IL‑4，并加入促熟细胞因子组合，于37℃， 5％CO2培养箱中孵育16～24小时；培养第96h，收集成熟DC细胞，进行细胞染色和流式检测和Western blotting方法检测蛋白质ISGylation表达水平。