[发明专利]一种发状念珠藻基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种发状念珠藻基因组DNA的提取方法离心收集发状念珠藻纯培养细胞，依次用无菌水、1.0％NaCl溶液和无菌水清洗；匀浆破壁；采用以下提取液对DNA进行提取，提取液为100mM Tris‑HCl、20mM EDTANa2、1.4M NaCl、0.2％巯基乙醇、2.0％CTAB，pH＝8.0。本发明与现有的试剂盒提取方法相比，所涉及的实验操作简单，试剂易得，成本低，得率高。采用本发明提取的基因组DNA的OD260/OD280比值均在1.8左右，纯度高，无弥散现象，完整性好，可直接用于PCR、基因重组等高精度的分子生物学实验研究。

主权项

一种发状念珠藻基因组DNA的提取方法，其特征在于：该提取方法包括以下步骤：1)离心收集发状念珠藻培养细胞，依次用无菌水、质量分数0.8～1.2％的NaCl水溶液以及无菌水清洗所述细胞；2)经过步骤1)后，对所述细胞进行破壁，然后离心收集沉淀于管底的破碎后的细胞；所述破壁的方式为采用玻璃匀浆器进行2～3次匀浆，破碎率85％以上；3)称取0.1～0.3g所述破碎后的细胞并转入装有2000～4000μL 65℃预热提取液的离心管中，充分混匀后置于65℃水浴中50～70min，其间摇动所述离心管若干次，得混合物；所述提取液的制备方法为：向无菌水中加入Tris‑HCl母液、EDTANa2、NaCl、巯基乙醇以及CTAB，得到含有100～105mM Tris‑HCl、20～22mM EDTANa2、1.4～1.5M NaCl、体积分数0.2～0.25％的巯基乙醇以及质量分数2.0～2.2％的CTAB的混合溶液，然后用NaOH调节混合溶液的pH至8.0，得提取液；4)向混合物中加入氯仿与异戊醇的混合液并翻动至不分相，然后离心并收集上清液；所述氯仿与异戊醇的体积比为24:1；5)对上清液按照步骤4)重复处理1～2次，向最后一次得到的上清液中加入2/3体积异丙醇，然后于‑18～‑20℃静置30～45min；6)离心收集步骤5)中静置过程析出的白色沉淀，依次用500～800μL 75％乙醇和60～90μL 1.5mol/L的NaAc水溶液的混合液、75％乙醇以及无水乙醇洗涤白色沉淀，洗涤后自然风干。