[发明专利]一种鉴定溶藻弧菌数量的荧光探针及其应用

摘要

本发明属于微生物检测技术领域，具体公开了一种鉴定溶藻弧菌数量的荧光探针及其应用。所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明设计的荧光探针对溶藻弧菌的特异性及准确性高，不会与其他细菌产生假阳性，将该荧光探针与RNA菌落印迹杂交技术相结合，可以得到一种简便快捷、准确率高的鉴定水环境中溶藻弧菌数量的方法，对弧菌流行病学的研究具有重要意义。

主权项

1.一种鉴定水环境中溶藻弧菌数量的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 水环境中溶藻弧菌的培养：取环境水样接种于琼脂平板上，置于28℃培养16h；S2. RNA菌落印迹：将培养后平板上每个单菌落转移至尼龙膜上；S3. 菌落印迹杂交：将印迹有菌落的尼龙膜转移至杂交液中于60℃预杂交30min；再将尼龙膜转移至含有荧光探针的杂交液中后，60℃杂交16h；再将杂交后的尼龙膜放入洗涤液中洗去多余探针；S4. 鉴定溶藻弧菌及计数：将洗涤后的尼龙膜在550nm波长下扫描照像，尼龙膜上的阳性克隆即为溶藻弧菌，阳性克隆的数量即为溶藻弧菌数量；其中，S3所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，荧光物质标记于探针核苷酸序列的5’端，所述荧光物质为荧光素Cy3、荧光素Cy5；S3所述杂交液成分为0.9 M NaCl、pH 7.0的50 mM PBS、5 mM EDTA和0.5%SDS；S3所述荧光探针的加入浓度为80 ng/ml。