[发明专利]水霉菌伊文思蓝活体染色方法

摘要

本发明公开水霉伊文思蓝活体染色方法，包括水霉株的分离、提纯培养、水霉孢子的获取，伊文思蓝染液的配制，染色方法等步骤，只要显微镜检染色后的水霉菌丝与孢子是否着蓝色，就可快速判定水霉菌丝的活力情况，通过细胞是否着色数量占整体细胞的百分比，就可简易计算出活细胞与死细胞的百分率。本发明具有简单、易行、快速、直观等特点；适用于科研院所、学校、技术推广站及水产养殖公司。

主权项

水霉伊文思蓝活体染色方法,其特征在于，包括以下步骤：(1)从水生动物体表取少量含水霉菌丝的组织或带有水霉菌的卵在75％的酒精中浸泡2‑3min,用无菌水冲洗数次后置于PDA链霉素半固体平板中央，平板倒置，在20‑25℃条件下培养；(2)切取步骤(1)平板中菌落边缘的菌丝块，在75％的酒精中浸泡2‑5sec,用无菌水冲选后将菌丝面朝下反接种到新的PDA半固体平板的中央，均匀在平板空白处放入水霉菌诱饵；半固体将平板倒置放入20‑25℃恒温培养恒温继续培养,待诱饵上覆盖菌丝后将其取出并置于无菌水的6孔板中,于20‑25℃培养直至游动孢子释放；吸取100μL孢子悬液至PDA半固体平板上均匀涂布,20‑25℃恒温培养并切取单菌落琼脂块到PDA半固体平板上进行纯化培养；提纯后的水霉菌株可置于4℃保存；(3)用2‑5‰的伊文思蓝染液，浸染水霉菌丝、孢子1‑10min,然后显微镜检观察，着蓝色者为死细胞；不着色者为活细胞；(4)根据未着色细胞占整体细胞的比例，可计算出活细胞的百分率；死细胞百分率(％)＝100－活细胞百分率。