[发明专利]一种禽蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍残留的多联检测方法

摘要

本发明属于禽类产品检测技术领域，涉及一种禽蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍残留的多联测定方法。样品经过低温反复冻融后，加入甲酸‑甲醇溶液，混合，离心，取上清液备用，加入水饱和正己烷，混合，超声，离心去除上层正己烷絮状物，下层为提取液，经阳离子交换固相萃取柱净化，再用配有ESI源的液相色谱‑串联质谱仪测定，对禽蛋中四种抗病毒药物残留进行准确的定性和定量分析。本发明的方法具有较高的特异性，能无污染、准确同时测定出金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍残留量，灵敏度高，为保证禽蛋质量安全提供技术支撑。

主权项

一种禽蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍残留的多联测定方法，包括样品前处理、标准曲线的绘制、仪器检测分析步骤，其特征在于：样品在甲酸‑甲醇溶液提取的基础上采用物理方法进行前处理；提取物采用配有ESI源的液相色谱‑串联质谱仪进行多联测定；所述物理方法分别为低温反复冻融、超声波超声、阳离子交换固相萃取净化；其具体操作方法如下：(1)前处理：提取：样品经去壳、将蛋清和蛋黄打碎、均质匀浆后再经低温反复冻融，即低温环境冷冻后，置于水浴中解冻，反复进行若干次，用甲酸‑1％甲醇溶液提取，离心，取上清液，加入水饱和的正己烷，经超声波超声提取处理，去除上层正己烷絮状物，下层为提取液，备用；净化：将备用的提取液加入依次用3ml甲醇、3ml水活化过的Cleanert PCX阳离子交换固相萃取柱中，先依次用3ml水溶液和3ml甲醇淋洗，减压抽干，再用4ml的5％氨化甲醇洗脱，于60℃下用氮气吹干，用体积比为20∶80的0.1％甲酸水溶液+甲醇溶解残渣，涡旋混合，经0.22μm有机相微孔滤膜后获得待测液进行LC‑MS/MS分析；(2)、绘制标准曲线：取标准工作液，用体积比为80∶20的甲醇‑0.1％甲酸溶液进行不同倍数稀释，绘制标准曲线；(3)、LC‑MS/MS检测分析：将步骤(1)的待测液进行液相色谱‑串联质谱法定性和定量分析，其中检测色谱条件为：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18反相色谱柱，2.1×50mm，1.8μm，40℃柱温，0.3mL/min流速，10μL进样量；流动相：A‑5mmol/L乙酸铵水溶液，B‑乙腈溶液；进行梯度洗脱程序如下：0min，流动相A为95％，流动相B为5％；2.0min，流动相A为95％，流动相B为5％；3.0min，流动相A为70％，流动相B为30％；4.0min，流动相A为10％，流动相B为90％；6.0min，流动相A为10％，流动相B为90％。