[发明专利]一种猪IgG1 Fc重组杆状病毒作为猪用疫苗载体的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪IgG1Fc重组杆状病毒作为猪用疫苗载体的制备方法，属于生物医药领域。本发明的制备方法采用克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒，重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验。本发明制备的表面展示猪IgG Fc重组杆状病毒在猪血清中具有较强的存活能力，可逃逸给血清补体对病毒的清除，从而提高疫苗免疫的有效抗原含量。

主权项

1.一种猪IgG1Fc重组杆状病毒作为猪瘟用疫苗载体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；2)重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；3)重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒；4)重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；5)重组杆状病毒做补体拮抗活性检测；6)重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验；所述的步骤1)中猪IgG Fc基因序列为序列表中的SEQ ID NO:1；所述的步骤1)中猪瘟病毒E2基因序列为序列表中的SEQ ID NO:2；所述的步骤1)中猪瘟病毒E2基因的表达受CMV启动子的控制；所述的步骤1)中杆状病毒表面展示载体为VSVG假型化杆状病毒；所述重组杆状病毒使用的杆状病毒表面展示载体利用VSVG的TM和CTD替换了gp64的TM和CTD，提高了对哺乳动物细胞的转导效率和对血清补体的拮抗能力。