[发明专利]一种增强重组乙肝疫苗免疫效应的方法

摘要

本发明公开一种增强重组乙肝疫苗免疫效应的方法，通过取出QSG7701细胞、HepG2细胞、K562细胞、A549细胞和5—8F细胞这五种细胞分别进行对照实验和ODN活化实验，然后对各个实验组进行全自动化分析仪检测ALT和LDH的含量，经表明加入ODN的细胞组的杀伤活性均高于空白对照组。本发明证实经ODN、活化的PBMC对HepG2细胞、K562细胞、5—8F细胞和A549细胞等细胞的杀伤活性均明显高于与相应空白对照组和淋巴细胞对照组。

主权项

一种增强重组乙肝疫苗免疫效应的方法，其特征是：其步骤如下，（1）无菌条件下取健康人外周血10mL，用肝素抗凝，淋巴细胞分离液常规分离PBMC，调细胞浓度为4.5‑5.5*10⁹/L备用，（2）通过常规的方法培养出五种细胞，分别是QSG7701细胞、HepG2细胞、K562细胞、A549细胞和5—8F细胞，然后对每种细胞的浓度进行调整，取4‑5*10³个细胞／孔加入培养基板中，以新鲜分离的健康人PBMC细胞为效应细胞，在每孔中加入1.5‑2.0*10⁵个PBMC，使其与靶细胞的比例为50：1；（3）在上述五种细胞的另外对照组中加入正常人体的淋巴细胞；（4）在培养基板的每个孔中加入ODN，使其终浓度为4‑5g／mL，效应细胞对照孔加入95‑105uL的培养基；（5）将上述五种细胞和对照组置于37℃、5％二氧化碳恒温培养箱中培养72h；每孔加入浓度为4‑4.5mg／mL新鲜配制的无菌MTT15‑25uL，继续培养5h，置于2000r／min的离心培养板上离心10min；（6）收集上清液，通过全自动化分析仪检测ALT和LDH的含量，经表明加入ODN的细胞组的杀伤活性均高于空白对照组。