[发明专利]一种利用SSR标记快速鉴定常规棉花品种真实性的方法

摘要

本发明公开了一种利用SSR标记快速鉴定常规棉花品种真实性的方法，首先筛选品种间多态性较高、扩增带型单一的SSR引物；将待检测样品与标准样品单粒种子混合，准备10-20份重复；采用热酚法提取种子DNA；利用核心SSR引物进行PCR扩增；PAGE胶检测扩增产物带型；根据杂合带型的比例确定品种的真实性和纯度。本发明利用品种间多态性较高、扩增带型单一的SSR引物进行检测，待测样品与标准样品单粒种子混合，提取DNA，准备10～20份重复，PCR扩增后PAGE胶检测，根据带型杂合度进行统计，确定品种的纯度及与标准样的匹配度，方法简单易行，时效性高，适用于黄河流域常规棉花品种商业化开发过程中品种权的保护。

主权项

一种利用SSR标记快速鉴定常规棉花品种真实性的方法，其特征在于，所述利用SSR标记快速鉴定常规棉花品种真实性的方法包括以下步骤：步骤一，利用生产上主推品种及育种骨干亲本资源，对棉花微卫星标记数据库进行筛选，从中选择扩增带型清晰、多态性高、带型单一的SSR标记组建引物库；步骤二，将待检样品与标准样品单粒种子混合，利用液氮研磨后装入1.5ml离心管中，准备10‑20份重复；步骤三，利用热酚法提取DNA，紫外分光光度计定量后，稀释到50ng/ul待用；步骤四，利用步骤一的SSR引物进行PCR扩增，扩增体系为10ul，内含PCR缓冲液，1.5mmol/L MgCl₂，200μmol/L dNTP_s，50ng微卫星引物和50～100ng模板DNA，Taq DNA聚合酶1U；反应程序：先94℃变性3min；然后35个循环的反应为94℃30s，56℃30s，72℃30s；最后72℃延伸7min；步骤五，取2.5μl扩增产物加入1.5ul Loading Buffer混匀上样，8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳2小时后硝酸银染色；步骤六，统计扩增产物的带型，根据公式：R＝n/(N+n)×100％；R：待测样品的纯合度；n：纯和带型数；N：杂合带型数；计算品种的纯合度。