[发明专利]一种砷‑纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种砷‑纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用，该砷‑纤维蛋白原螯合物是砷离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成，可用于制备检测人体砷‑纤维蛋白原螯合物的试剂。本发明首次证实了砷离子可直接作用于纤维蛋白原。本发明建立了砷‑纤维蛋白原螯合物的定性定量检测方法，以检测一个地区人群体内纤维蛋白原的含量，从而间接反映一个地区砷污染程度以及对人群的健康影响。本发明建立的砷‑纤维蛋白原螯合物定量检测方法准确度高重、复性好。

主权项

一种砷‑纤维蛋白原螯合物，其特征在于，该砷‑纤维蛋白原螯合物是砷离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成；该砷‑纤维蛋白原螯合物是通过以下步骤制备而成：A）砷‑纤维蛋白原鳌合物的合成：在提纯源于人体的纤维蛋白原或按照生物学方法重组的纤维蛋白原中加入砷离子进行螯合反应，得到反应溶液；B）砷‑纤维蛋白原螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A）反应溶液中未反应的纤维蛋白原、特异性抗体和砷离子，即得砷‑纤维蛋白原螯合物，具体操作如下：（1）溶解样品：将上述步骤A）的砷‑纤维蛋白原螯合物溶解于生理盐水中，得砷‑纤维蛋白原螯合物溶液；（2）平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与纤维蛋白原特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；（3）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1）所述溶液，然后上柱，使纤维蛋白原与填料特异性结合；（4）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05‑0.10mol/L的Na2HPO4溶液进行洗脱；（5）收集：收集步骤（4）的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；（6）透析：将步骤（5）中的收集的洗脱液装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；（7）平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与砷特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；（8）上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（6）中样本，然后上柱；（9）洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5‑1.0mol/L的Na2HPO4溶液进行洗脱；（10）收集：收集步骤（9）的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；（11）透析：将步骤（10）的洗脱液装透析袋，用ddH2O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得砷‑纤维蛋白原螯合物。