[发明专利]一种猪胃肠道内容物代谢组学提取方法有效
申请号: | 201510413732.8 | 申请日: | 2015-07-15 |
公开(公告)号: | CN104977200B | 公开(公告)日: | 2017-12-19 |
发明(设计)人: | 何庆华;李铁军;任萍萍;孔祥峰;印遇龙;伍力 | 申请(专利权)人: | 中国科学院亚热带农业生态研究所 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N24/08 |
代理公司: | 长沙正奇专利事务所有限责任公司43113 | 代理人: | 卢宏,周栋 |
地址: | 410125 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | 本发明公开了一种猪胃肠道内容物代谢组学提取方法,方法如下称量解冻的胃肠道内容物1g,采用1M NaOH溶液和1M HCl溶液将pH值调整到8.0,然后称取0.1g混匀的内容物,加入0.1M磷酸盐缓冲液(pH值8.0)1mL,液氮速冻后,水浴锅中超声并解冻,置于组织破碎仪中(20Hz,30s)破碎,如此反复冻融、超声和破碎处理3个循环。最后,4℃,5 000rpm离心10min,取上清液0.6mL加入5mm核磁管备用。可检测代谢物51种,其中,氨基酸20种,短链脂肪酸7种,三羧酸循环代谢物5种,其他代谢物19种,整个提取过程仅需3h。谱峰漂移受pH值影响很小。因此,该方法不仅提高了代谢物的提取率,提高了核磁谱图的质量,而且简化了提取流程。 | ||
搜索关键词: | 种猪 胃肠道 内容 代谢 提取 方法 | ||
【主权项】:
一种猪胃肠道内容物代谢组学提取方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)用1M NaOH溶液和1M HCl溶液将解冻的猪胃肠道内容物pH值调整到2.0—12.0;(2)取猪胃肠道内容物加入0.1M或1M的磷酸盐缓冲液中,猪胃肠道内容物与磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:20至1:2,质量体积比的单位为g/mL,经液氮速冻后,于水浴锅中超声解冻,然后置于组织破碎仪中破碎;将破碎后的猪胃肠道内容物再重复液氮速冻、超声解冻、破碎仪破碎处理1—3次;(3)将经步骤(2)处理后的猪胃肠道内容物于4℃、12000rpm离心,取上清液,即为猪胃肠道内容物的提取物。
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