[发明专利]一种猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗兔体效力检验方法

摘要

本发明涉及建立一种新型猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗兔体效力检验方法模型，本方法采用生产性能和质量稳定的SPF兔作为载体，按照rAd-E0-E2免疫兔体后14天，用猪瘟脾淋苗作为攻毒用毒株攻毒后连续3天监测兔体反应热，根据兔体出现定型热情况(≥40.5℃)评价该疫苗的保护效力，建立了rAd-E0-E2兔体效力检验方法模型。该方法建立过程中，通过对免疫组和对照组的体温监测、兔脾脏/体重指数比、脾脏组织切片观察、RT-PCR检测和猪瘟脾淋病毒分离鉴定，确定以上结果显示的rAd-E0-E2免疫保护效果一致，并最终确定采用相对简便易行的体温监测的方法进行评价。

主权项

一种猪瘟病毒基因重组腺病毒载体疫苗兔体效力检验的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1)冻干疫苗按照不同的稀释梯度免疫兔体后第14天，用猪瘟脾淋毒接种兔的耳缘静脉攻毒，于攻毒后连续3天每6h检测兔体反应热；2)攻毒后第3天剖杀兔，称兔体重和脾脏重量，计算兔脾脏/体重指数比；3)将兔脾脏放于10％福尔马林固定、做组织切片，显微镜观察兔脾病理学变化；4)将兔脾称取1g提取脾脏总RNA,采用RT‑PCR方法检测猪瘟脾淋毒的存留情况；5)将兔脾组织低温下研磨，通过0.22um滤膜过虑除菌，滤液接种ST细胞，盲传3代后，进行IFA鉴定是否有猪瘟脾淋毒感染细胞；6)判定方法：当兔体温均＜40.5℃、兔脾脏/体重指数比mean≤0.055％、兔脾组织显微观察未出现充淤血、RT‑PCR均检测不到猪瘟脾淋毒基因存留和IFA病毒分离均为阴性同时成立时，判为该疫苗保护兔体免受猪瘟脾淋毒的攻击；当其中任何一项检测均不在此范围内时，判为该疫苗未能保护兔免受猪瘟脾淋毒的攻击。