[发明专利]一种人工诱导多能性干细胞快切割方法

摘要

本发明涉及到一种细胞分割方法，尤其涉及到一种人工诱导多能性干细胞快切割方法。该方法使用1毫米长枪头将人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸后，在显微镜下观察，取大小合适的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，完成人工诱导多能性干细胞的分割，可以进行传代。人工诱导多能性干细胞快切割方法，需要的细胞培养基较少，能大大降低细胞传代过程中的成本；通过1毫米长枪头的吸吹气对人工诱导多能性干细胞，大大降低了，人工诱导多能性干细胞分割过程的难度，提高了人工诱导多能性干细胞分割效率和传代成功率。

主权项

一种人工诱导多能性干细胞快切割方法，其特征在于其步骤为：(1)将人工诱导多能性干细胞放置在直经为3.5厘米、6厘米或10厘米的细胞培养皿内培养，使得人工诱导多能性干细胞覆盖掉细胞培养皿底面积60％以上；(2)将步骤(1)所述细胞培养皿中的培养基吸出，使用1‑3毫升磷酸盐缓冲液(PBS)对细胞培养皿进行清洗，然后将磷酸盐缓冲液吸出；(3)向细胞培养皿中加入0.5‑1毫升细胞分裂素(CTK)后摇均匀，常温下静止30‑120秒，在此期间，至少拍打细胞培养皿一次；(4)在显微镜下观察，待基底细胞剥离后，加入2‑5毫升PBS进行清洗，然后将PBS吸出，重复上述加入PBS操作1‑2次，在显微镜下观察，确保细胞剥离液完全被洗净，然后将PBS彻底吸出；(5)向细胞培养皿中加入人工诱导多能性干细胞培养液1‑1.5毫升，然后用细胞刷将人工诱导多能性干细胞刷离培养皿；(6)使用1毫米长枪头将步骤(5)中制备出的人工诱导多能性干细胞吸入接着吹出，反复吹吸3‑10次，在显微镜下观察，将大小在30‑100微米内的人工诱导多能性干细胞块，转移到预先准备好的含有基底细胞的培养皿中，人工诱导多能性干细胞就完成了分割，可以进行传代。